Vad är fluorescensspektroskopi?

Vad är ett fluorescensspektrum?

Fig. 1: Ett fluorescens excitationsspektrum (blått) och ett emissionsspektrum (lila) är spegelbilder av varandra

Fluorescensspektrum i stationärt tillstånd är när molekyler, som exciteras av en konstant ljuskälla, avger fluorescens och de emitterade fotonerna, eller intensiteten, detekteras som en funktion av våglängden. Ett fluorescensemissionsspektrum är när excitationsvåglängden är fixerad och emissionsvåglängden skannas för att få en kurva över intensiteten i förhållande till emissionsvåglängden.

Ett fluorescens excitationsspektrum är när emissionsvåglängden är fixerad och excitationsmonokromatorvåglängden skannas. På detta sätt ger spektrumet information om de våglängder vid vilka ett prov kommer att absorbera så att det emitterar vid den enda emissionsvåglängden som valts för observation. Det är analogt med absorbansspektrum, men är en mycket känsligare teknik när det gäller detektionsgränser och molekylär specificitet. Exciteringsspektra är specifika för en enda emitterande våglängd/art till skillnad från ett absorbansspektrum, som mäter alla absorberande arter i en lösning eller ett prov. Emissions- och excitationsspektra för en viss fluorofor är spegelbilder av varandra. Typiskt sett uppträder emissionsspektrumet vid högre våglängder (lägre energi) än excitations- eller absorbansspektrumet.

Dessa två spektraltyper (emission och excitation) används för att se hur ett prov förändras. Den spektrala intensiteten och eller toppvåglängden kan förändras med varianter som temperatur, koncentration eller interaktioner med andra molekyler runt omkring. Detta inkluderar quenchermolekyler och molekyler eller material som involverar energiöverföring. Vissa fluorophorer är också känsliga för egenskaper i lösningsmedelsmiljön, t.ex. pH, polaritet och vissa jonkoncentrationer.