Luciferaseanalyser

Det är lättare att förstå hur en promotor eller ett responselement kan styra genuttrycket när man studerar det med en reportergen. Luciferasenzymer är idealiskt lämpade för reporteranalyser med enkel ljusbaserad detektion och hög känslighet som kan kvantifiera även små förändringar i uttrycket. Medan reporteranalyser ofta används för att bedöma förändringar i promotoraktivitet kan de också användas för att undersöka signaltransduktion, proteinfunktion, miRNA-reglering och till och med realtidsmätning av processer i levande organismer.

Grunden för en reporteranalys är vektorn, som bär på reportergenen, och detektionsreagenserna som tillhandahåller ett substrat för att omvandla luciferasenzymets aktivitet till en ljussignal. Reagens för detektering av dubbla luciferaser släcker den första reportagesignalen innan den andra avläses, vilket gör det möjligt att mäta två reportrar sekventiellt från samma prov. Den andra rapportören ingår ofta som en intern kontroll för mer exakta data.

När rapportörvektorn väljs ut och eventuella element klonas in (om det behövs) introduceras vektorn i odlade celler, vanligen med hjälp av transfektionsbaserade metoder, uttrycks och aktiviteten detekteras med lytiska (slutpunkt) reagenser eller reagenser för levande celler för att mäta förändringar i samma celler över tiden. Luciferasreporteranalyser kan multiplexas med andra analyser för att bedöma apoptos, metabolism med mera. Mätning av luciferaseanalyser utförs vanligtvis med hjälp av en plattbaserad luminometer.