Enzymaktivitetsanalys

De allra flesta katalytiska biologiska processer utförs av enzymer som tillhandahåller en mängd olika funktioner i levande organismer. De är oumbärliga för metaboliska processer, cellulär signalering och reglering och kan generera rörelse och aktiv transport av molekyler. Enzymatiska reaktioner omvandlar specifikt substratmolekyler till kemiskt modifierade produkter. Dessa modifieringar omfattar proteolytisk eller glykolytisk nedbrytning, kemiska modifieringar som fosforylering, acylering, glykosylering eller oxidativa och reduktiva processer. Dysreglerad enzymaktivitet kan leda till sjukdomstillstånd. Därför anses enzymer vara attraktiva mål för farmakologisk intervention vid läkemedelsbehandling.

Våra årtionden av erfarenhet av utformning och tillverkning av aktiva enzymer och deras substrat stöder utvecklingen av en ständigt växande portfölj av biokemiska tester. Vi tillhandahåller tjänster för enzymatiska analyser för att hjälpa forskare som fokuserar på enzym- och proteinforskning:

• Kinetisk utvärdering av enzymaktivitet och hämning.
• Screening och validering av hämmare.
• IC50-bestämning av läkemedelssubstanser.
• Undersökningar av enzymhämmare som analyserar verkningssätt
• Undersökningar om reversibilitet av enzymhämning
• Substratprofilering som analyserar enzymernas selektivitet

Våra analyser av enzymaktivitet innebär att det intressanta proteinet först immunfångas och sedan mäts substrat- eller produktomsättningen. I dessa används endast monoklonala antikroppar som har undersökts för att isolera enzymet i aktiv form och i komplex som sannolikt representerar deras föreningar in situ. Det finns många fördelar. Enzymet separeras från andra proteiner som använder eller producerar samma substrat eller produkter som screenats, vilket möjliggör enkla analyser, t.ex. användning av ATP, NADH, pyruvat etc., som är föremål för flera reaktioner in vivo. För de flesta av de enzymer för vilka vi har aktivitetsanalyser tillhandahåller vi också Sandwich ELISA-analyser av kvantitet. Genom att kombinera de två är det möjligt att generera specifika aktivitetsdata. Eftersom enzymet är separerat från andra cellkomponenter kan dessutom de posttranslationella modifieringar (PTM) som det innehåller vid analystillfället mätas t.ex. genom efterföljande masspektrometri eller reaktion med PTM-specifika antikroppar.