Testul de diagnostic pentru Angelman și Prader-Willi este rapid, precis și mai puțin costisitor
On ianuarie 5, 2022 by adminCercetătorii au dezvoltat un nou test de diagnostic molecular rapid și precis pentru pacienții cu sindrom Angelman și Prader-Willi.
Studiul lor, „A rapid and accurate methylation-sensitive methylation-sensitive high-resolution melting analysis assay for the diagnosis of Prader Willi and Angelman patients”, a fost publicat în Molecular Genetics & Genomic Medicine.
Sindromurile Prader-Willi (PWS) și Angelman (AS) sunt două tulburări genetice rare cauzate de defecte de amprentă în aceeași regiune a cromozomului 15. În timp ce PWS este asociat cu pierderea de funcție a genelor paterne, Angelman este cauzat de pierderea de funcție a genelor materne. Amprentarea genomică este procesul prin care o copie a unei gene, fie copia maternă, fie cea paternă, este redusă la tăcere printr-o modificare chimică a ADN-ului numită metilare.
„Diagnosticul de laborator al PWS și AS este o provocare și necesită mai multe metode moleculare și citogenetice pentru a elucida mecanismul genetic care duce la dezvoltarea sindromului”, au scris cercetătorii.
Analizele modelelor de metilare a ADN-ului într-o regiune specifică a cromozomului 15 – cunoscută sub numele de locusul SNURF-SNRPN prin reacția în lanț a polimerazei cu metilare specifică (MS-PCR, o tehnică care detectează modificările în metilarea ADN-ului în regiuni specifice ale unei secvențe de ADN) – permite cercetătorilor să diagnosticheze și să distingă pacienții cu PWS de cei cu AS.
„Chiar dacă secvențierea ADN este considerată „standardul de aur” pentru depistarea mutațiilor, această metodologie rămâne relativ costisitoare, laborioasă și consumatoare de timp”, au scris cercetătorii.
În acest studiu, oamenii de știință au dezvoltat o metodă bazată pe topirea de înaltă rezoluție (HRM, o tehnică care permite cercetătorilor să distingă între secvențele de ADN normale și cele cu mutații pe baza profilului lor de topire). Este o alternativă simplă, rapidă, sensibilă, specifică și cu costuri reduse la secvențierea ADN-ului pentru a diagnostica și distinge pacienții cu PWS și AS.
Pentru a testa și valida noua metodă MS-HRM, cercetătorii au izolat mai întâi ADN-ul din probe de sânge de la 43 de pacienți suspectați de a avea fie PWS, fie AS. Apoi au efectuat și comparat rezultatele MS-PCR standard cu noua metodă MS-HRM.
Rezultatele testelor au arătat că MS-HRM și MS-PCR au fost în concordanță în toate cazurile, identificând 19 (44%) pacienți cu PWS, trei (7%) cu AS și 21 (49%) fără alterări.
Subsecventă hibridizare fluorescentă in situ (FISH, o tehnică care permite cercetătorilor să vizualizeze regiuni specifice ale cromozomilor marcate cu o sondă fluorescentă) efectuată la 19 (44%) pacienți a detectat patru cazuri de PWS cauzate de o deleție (în care o parte din secvența de ADN a unei gene este pierdută) în cromozomul 15.
MMS-HRM „nu are nevoie de tehnici suplimentare, cum ar fi electroforeza pe gel de agaroză , reducând timpul necesar pentru a obține un rezultat precis și reducând riscurile de contaminare încrucișată între probe”, au scris cercetătorii.
„Sensibilitatea MS-HRM permite detectarea unei fracțiuni minuscule de probă este importantă în analiza probelor, care sunt dificil de obținut în special de la nou-născuți hipotoni. În plus, reproductibilitatea ridicată a HRM face ca această metodă să fie potrivită atât pentru cercetare, cât și pentru aplicații de diagnosticare în studiul sindroamelor PWS și AS”, au adăugat ei.
„Un diagnostic rapid și precis al PWS sau AS permite o intervenție medicamentoasă eficientă, evitând mai multe caracteristici ale acestor tulburări, oferind o calitate mai bună a vieții”, au concluzionat ei.
- Detalii autor
.
Lasă un răspuns