Teste de luciferază

Înțelegerea modului în care un promotor sau un element de răspuns poate controla expresia genei este mai ușoară atunci când este studiată cu o genă reporter. Enzimele luciferază sunt ideale pentru testele reporter cu detecție simplă bazată pe lumină și sensibilitate ridicată care poate cuantifica chiar și modificări mici ale expresiei. În timp ce testele reporter sunt adesea folosite pentru a evalua modificările în activitatea promotorilor, ele pot fi, de asemenea, folosite pentru a investiga transducția semnalelor, funcția proteinelor, reglarea miARN și chiar măsurarea în timp real a proceselor din organismele vii.

Baza unui test reporter este vectorul, care poartă gena reporter, și reactivii de detecție care furnizează un substrat pentru a transforma activitatea enzimei luciferază într-un semnal luminos. Reactivii de detecție dual-luciferază sting primul semnal reporter înainte de citirea celui de-al doilea pentru a permite măsurarea secvențială a doi reporteri din aceeași probă. Cel de-al doilea raportor este adesea inclus ca un control intern pentru obținerea unor date mai precise.

După ce vectorul raportor este selectat și toate elementele sunt clonate (dacă este necesar), vectorul este introdus în celule cultivate, de obicei folosind metode bazate pe transfecție, exprimat și activitatea este detectată cu reactivi litici (punct final) sau cu reactivi de celule vii pentru măsurarea schimbărilor în aceleași celule în timp. Testele reporterilor de luciferază pot fi multiplexate cu alte teste pentru a evalua apoptoza, metabolismul și altele. Măsurarea testelor de luciferază se realizează de obicei cu ajutorul unui luminometru pe bază de placă.

.