De unde știu dacă anticorpul va avea reacții încrucișate?

Reactivitatea încrucișată apare atunci când un anticorp crescut împotriva unui antigen specific recunoaște doi antigeni care au regiuni structurale similare.

Ce este reactivitatea încrucișată?

Un anticorp are o secvență specifică de aminoacizi (regiunea Fab) care îi dictează afinitatea pentru un antigen specific. Reactivitatea încrucișată între antigene apare atunci când un anticorp crescut împotriva unui antigen specific are o afinitate ridicată concurentă față de un antigen diferit. Acesta este adesea cazul atunci când doi antigeni au regiuni structurale similare pe care anticorpul le recunoaște.

Reactivitatea încrucișată poate invalida rezultatele unui experiment și, prin urmare, poate avea un impact asupra reproductibilității științifice. Astfel, testarea unui anticorp pentru reactivitate încrucișată cu proteine strâns înrudite este un experiment de validare critic.

Cum verific reactivitatea încrucișată?

Reactivitatea încrucișată nu este întotdeauna o calitate negativă. Ea poate îmbunătăți uneori utilitatea unui anticorp. De exemplu, reactivitatea încrucișată a unui anticorp pentru o țintă între specii permite ca același anticorp să fie utilizat în mai multe organisme model.

Reactivitatea încrucișată între specii apare adesea în cazul anticorpilor derivați din antigenul uman. Mulți anticorpi umani din catalogul Proteintech au o reactivitate încrucișată semnificativă cu proteinele omologe din modelele non-umane, cum ar fi șoarecele, șobolanul, maimuța sau peștele zebră.

Pe baza omologiei unei secvențe de proteine și a publicațiilor care utilizează anticorpii noștri la organisme non-umane, mulți dintre anticorpii Proteintech pot fi utilizați nu numai pentru probe umane, ci și pentru o varietate de organisme. Omologia poate fi evaluată folosind o aliniere a secvenței de secvențe perechi a imunogenului și a antigenului țintă prin intermediul site-ului NCBI-BLASTwebsite, iar informații suplimentare pot fi verificate pe site-ul de resurse proteice universale UniProt.

Care este „numărul corect” pentru omologie pentru a prezice reactivitatea încrucișată?

Pe baza experienței noastre, dacă imunogenul și secvența proteinei cu potențială reacție încrucișată au o omologie de 75% a secvenței, se prezice că aceasta va reacționa încrucișat. Dacă proba dvs. este non-umană, se recomandă un policlonal, deoarece există un amestec de epitopi recunoscuți.

Anticorpul meu are reacție încrucișată cu alte specii?

Depinde de gradul de similitudine a secvenței proteice între imunogen și secvența proteinei cu potențială reacție încrucișată.

Cum se evită reactivitatea încrucișată în western blot

Dacă este posibil, se recomandă utilizarea anticorpului secundar specific primului anticorp utilizat; de exemplu, dacă anticorpul primar este de șoarece, atunci anticorpul secundar ar trebui să fie anti-șoarece IgG-HRP. În cazul în care anticorpul secundar este policlonal și generat împotriva moleculei IgG întregi, atunci anticorpul de iepure care recunoaște anticorpul primar Ab de șoarece ar putea să nu fie cea mai bună alegere din cauza recunoașterii regiunii comune a lanțului ușor Kappa.

Cum să evitați reactivitatea încrucișată în timpul experimentelor de imunomarcație

Ar putea apărea reactivitate încrucișată în testele de imunomarcație care utilizează probe derivate din țesuturi; prin urmare, este obișnuit să se utilizeze fragmente, mai degrabă decât IgG-uri întregi, ca imunoglobuline primare (de exemplu, atunci când se lucrează cu anticorpi de șoarece pe țesuturi de șoarece). În plus, atunci când se efectuează o colorare multiplă, pentru a vă asigura că nu există reacții încrucișate, încercați să utilizați anticorpi secundari diferiți, de exemplu, anticorpi de iepure anti-capră 568 cu un anticorp de iepure anti-șoarece 488, care sunt destul de comuni și ușor de găsit.

Ce este absorbția încrucișată a anticorpilor secundari și reactivitatea încrucișată?

Anticorpii secundari cu absorbție încrucișată sunt acei anticorpi policlonali care sunt fabricați cu o etapă suplimentară de purificare pentru a filtra membrii care se leagă de speciile de imunoglobulină (IgG) care nu sunt vizate. Acest proces poate reduce reactivitatea încrucișată a speciilor și crește specificitatea. În funcție de configurația experimentului, există varietăți de anticorpi secundari cu absorbție încrucișată și cu absorbție foarte încrucișată.

1. Anticorpi policlonali vs. monoclonali

2. Selecția anticorpilor secundari

3. Antigenul proteic sau peptidic? Avantaje și dezavantaje

.