Ce este Spectroscopia de fluorescență?

Ce este un spectru de fluorescență?

Fig. 1: Un spectru de excitație de fluorescență (albastru) și un spectru de emisie (violet) sunt imagini în oglindă unul față de celălalt

Spectrele de fluorescență în stare staționară sunt atunci când moleculele, excitate de o sursă constantă de lumină, emit fluorescență, iar fotonii emiși, sau intensitatea, sunt detectați în funcție de lungimea de undă. Un spectru de emisie de fluorescență este atunci când lungimea de undă de excitație este fixată și lungimea de undă de emisie este scanată pentru a obține o diagramă a intensității în funcție de lungimea de undă de emisie.

Un spectru de excitație de fluorescență este atunci când lungimea de undă de emisie este fixată și lungimea de undă a monocromatorului de excitație este scanată. În acest fel, spectrul oferă informații despre lungimile de undă la care o probă va absorbi astfel încât să emită la o singură lungime de undă de emisie aleasă pentru observație. Este analog cu spectrul de absorbție, dar este o tehnică mult mai sensibilă în ceea ce privește limitele de detecție și specificitatea moleculară. Spectrele de excitație sunt specifice unei singure lungimi de undă/specii emițătoare, spre deosebire de un spectru de absorbție, care măsoară toate speciile absorbante dintr-o soluție sau eșantion. Spectrele de emisie și de excitație pentru un anumit fluorofor sunt imagini în oglindă una față de cealaltă. De obicei, spectrul de emisie apare la lungimi de undă mai mari (energie mai mică) decât spectrul de excitație sau de absorbție.

Aceste două tipuri spectrale (emisie și excitație) sunt folosite pentru a vedea cum se modifică o probă. Intensitatea spectrală și sau lungimea de undă a vârfului se poate modifica în funcție de variante, cum ar fi temperatura, concentrația sau interacțiunile cu alte molecule din jurul său. Aceasta include moleculele stingătoare și moleculele sau materialele care implică transferul de energie. Unii fluorofori sunt, de asemenea, sensibili la proprietățile mediului de solvent, cum ar fi pH-ul, polaritatea și anumite concentrații de ioni.

.