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Por causa da necessidade de reduzir custos de mão-de-obra, muitos laboratórios estão substituindo o tradicional teste de triagem do algoritmo de teste da sífilis por um teste manual de não resposta, seguido por um teste de anticorpos anti-Treponema pallidum – com um algoritmo “reverso” que usa um imunoensaio automatizado para triagem do anti-T. anticorpos IgG antipalidum. Uma determinação do título de reagente de plasma rápido (RPR) é então realizada em amostras reactivas a IgG para (i) verificar a sífilis através de um método alternativo e (ii) obter um título para a gestão do doente. Além disso, alguns laboratórios também realizam um ensaio tradicional de treponemal (anticorpo treponemal fluorescente absorvido ou ensaio de aglutinação de partículas de T. pallidum) em amostras que dão positivo através de um ensaio de rastreio IgG. Uma série de estudos mostrou que os imunoensaios anti-T. pallidum IgG têm sensibilidades e especificidades comparáveis às de outros ensaios de treponema e ensaios de não resposta (1, 3, 4). Tal como com outros testes de rastreio altamente sensíveis, os imunoensaios anti-T. pallidum IgG podem gerar resultados falso-positivos, com um menor valor preditivo positivo em populações de baixa prevalência (2). Yen-Lieberman et al. recentemente relataram que a força do sinal (índice de anticorpos ) do imunoensaio de fluxo múltiplo de sífilis IgG Bioplex 2200 (Laboratórios Bio-Rad, Hercules, CA) poderia ser usada para identificar resultados provavelmente falso-positivos e assim reduzir a necessidade de testes confirmatórios (5). Eles demonstraram que as amostras com Bioplex AIs de ≥6.0 foram sempre positivas quando testadas com um imunoensaio enzimático suplementar (EIA) e, portanto, propuseram um algoritmo no qual apenas amostras com Bioplex sífilis IgG AI de <6 são submetidas a EIA de confirmação. Seu estudo foi realizado em amostras de uma população de baixa prevalência, mas não descreveu características específicas da população. A fim de verificar melhor a eficácia do uso dos dados quantitativos de Bioplex sífilis IgG, avaliamos os resultados da IA de três diferentes coortes de pacientes (indivíduos encarcerados, mulheres que freqüentam clínicas de obstetrícia e ginecologia, e mulheres no parto) por sua capacidade de prever os resultados do TP-PA. Os dados foram estratificados pelo resultado do teste RPR. Este estudo foi aprovado pelo Conselho de Revisão Institucional da University of Texas Medical Branch (UTMB).

Realizamos uma revisão retrospectiva dos resultados dos testes e dos dados dos pacientes do sistema de informação laboratorial da UTMB para amostras de sífilis submetidas a testes de rotina durante dezembro de 2010 e janeiro de 2011. Um total de 1.849, 3.512 e 873 espécimes foram ligados a indivíduos encarcerados, mulheres que frequentavam clínicas UTMB para cuidados pré-natais ou ginecológicos, e mulheres no parto, respectivamente. Entre os indivíduos encarcerados, mais de 96% dos espécimes eram de homens. A distribuição dos espécimes por raça ou etnia individual foi a seguinte: Hispânicos, 49,4%; afro-americanos, 27%; brancos/não-hispânicos, 21,4%; e outros/desconhecidos, 2,2%. Entre os pacientes OB/Gin, a distribuição dos espécimes por raça ou etnia individual foi a seguinte: Hispânicos, 63,1%; brancos/não hispânicos, 21,8%; afro-americanos, 12,6%; e outros/desconhecidos, 2,5%. Entre as mulheres que fizeram o parto no hospital UTMB, a distribuição dos espécimes por raça ou etnia individual foi a seguinte: Hispânico, 71,8%; branco/não-hispânico, 15,8%; afro-americano, 10%; e outros/ desconhecidos, 2,4%.

Os ensaios Bioplex 2200 sífilis IgG, RPR (Sure-Vue; Biokit USA, Inc., Lexington, MA), e TP-PA (Fujirebio, Inc., Tokyo, Japão) foram realizados de acordo com as instruções dos fabricantes. O ensaio Bioplex 2200 de sífilis IgG foi aprovado pela U.S. Food and Drug Administration para uso como um ensaio qualitativo. Inicialmente, as amostras com resultados equívocos (IA = 0,9 a 1,0) ou reactivos (IA ≥ 1,1) pelo Bioplex foram testadas apenas por RPR semiquantitativo. Nos casos em que o teste RPR não foi reactivo, foi realizado um ensaio de TP-PA. A partir de meados de Dezembro de 2010, todos os espécimes que eram equívocos ou reactivos pelo Bioplex foram testados por ensaios semiquantitativos RPR e TP-PA. A sensibilidade e especificidade do Bioplex, com base num valor de corte da IA de 6 ou 8, foram calculadas usando tabelas de contingência 2 por 2. O ensaio TP-PA foi considerado o método de referência. A análise da característica operacional do receptor (ROC) foi realizada usando a calculadora baseada na web disponível em http://www.rad.jhmi.edu/jeng/javarad/roc/JROCFITi.html (acessada em 5 de julho de 2011).

As taxas anti-T. pallidum IgG-reactive determinadas pelo ensaio Bioplex para as coortes encarceradas, OB/Gyn e parto foram de 7,5%, 1,6% e 2,6%, respectivamente (dados não mostrados). A capacidade do valor de IA do ensaio Bioplex IgG para prever um resultado de TP-PA reativo variou por coorte de pacientes e pelo respectivo título de RPR (Tabela 1). Como relatado por Yen-Lieberman et al. (5), os espécimes que exibiram títulos de RPR reativos tiveram maior probabilidade de exibir resultados de TP-PA reativos. Entretanto, avaliamos amostras com um título de RPR de 1:1 separadamente daquelas com títulos de ≥2 devido a evidências clínicas e epidemiológicas indicando que um título de RPR de 1:1 nem sempre é suficiente para confirmar um resultado de IgG reativo. De facto, os nossos dados mostram que as amostras reactivas a IgG com títulos de RPR de ≥2 são mais susceptíveis de serem confirmadas pelo ensaio TP-PA. Entre as coortes OB/Gyn e parto, não houve resultados de TP-PA-não reativos quando o título RPR foi ≥2. Entre as coortes encarceradas e OB/Gin, um corte de 8 IA forneceu maior especificidade do que um corte de 6. Yen-Lieberman et al. mostraram que uma IA de 6 forneceu 100% de especificidade para sua população estudada (5). Mesmo com um corte de 8, a especificidade do ensaio Bioplex IgG em nosso estudo não alcançou 100% na coorte encarcerada para espécimes com resultados RPR-não-reativos ou com um título de 1:1 (muitas vezes considerado um título equívoco). Este coorte está em alto risco para sífilis, com uma taxa de IgG-reativa de 7,5%. Entre as amostras de indivíduos encarcerados, 85,2% (98/115) das amostras reactivas a IgG foram confirmadas pelo ensaio TP-PA (dados não mostrados). Em comparação, a taxa de reactividade de IgG na coorte OB/Gin foi de 1,6%; 63,0% (29/46) dos resultados foram confirmados pelo ensaio TP-PA. Para avaliar o efeito dos valores de corte da AI de sífilis Bioplex IgG na sensibilidade e especificidade dos ensaios, foi realizada uma análise ROC. A análise ROC mostrou que a especificidade do ensaio de IgG de sífilis para identificar amostras confirmadas com TP-PA geralmente declinou rapidamente em valores de IA abaixo de 8,

Em conclusão, demonstramos pela primeira vez a utilidade dos dados quantitativos de Bioplex sífilis IgG em diferentes populações de pacientes e a utilidade de um valor de corte para identificar espécimes que podem não requerer um ensaio de treponema adicional para confirmação. Um corte de 8 de AI foi necessário para alcançar a máxima especificidade em nossas coortes de encarcerados e OB/Gin. Os títulos RPR de ≥2 são suficientes para sugerir que um Bioplex IgG reativo resulta em coortes de baixo e alto risco representa uma determinação precisa da exposição ao T. pallidum. Finalmente, os laboratórios que optam por usar o valor de IA como parte de seu teste de IgG de sífilis devem verificar independentemente as características de desempenho desta modificação ao procedimento recomendado pelo fabricante. Isto também é importante porque, como demonstramos, o corte ideal de IA pode variar dependendo da população de pacientes.

(Estes dados foram apresentados em parte na Reunião Anual da American Society for Microbiology em Nova Orleans, LA, em maio de 2011.)