Test diagnostyczny Angelmana i Pradera-Williego jest szybki, dokładny i mniej kosztowny
On 5 stycznia, 2022 by adminBadacze opracowali nowy szybki i dokładny molekularny test diagnostyczny dla pacjentów z zespołem Angelmana i Pradera-Williego.
Badania te, „A rapid and accurate methylation-sensitive high-resolution melting analysis assay for the diagnosis of Prader Willi and Angelman patients,” zostały opublikowane w Molecular Genetics & Genomic Medicine.
Zespoły Pradera-Williego (PWS) i Angelmana (AS) to dwa rzadkie zaburzenia genetyczne spowodowane defektami imprintingu w tym samym regionie chromosomu 15. Podczas gdy PWS jest związany z utratą funkcji genów ojcowskich, Angelman jest spowodowany utratą funkcji genów matczynych. Genomowy imprinting jest procesem, w którym jedna kopia genu, matczyna lub ojcowska, jest wyciszana przez chemiczną modyfikację DNA zwaną metylacją.
„Diagnostyka laboratoryjna PWS i AS jest wyzwaniem i wymaga kilku metod molekularnych i cytogenetycznych, aby wyjaśnić mechanizm genetyczny, który prowadzi do rozwoju zespołu,” napisali badacze.
Analiza wzorów metylacji DNA w określonym regionie chromosomu 15 – znanym jako locus SNURF-SNRPN za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy specyficznej dla metylacji (MS-PCR, technika, która wykrywa zmiany w metylacji DNA w określonych regionach sekwencji DNA) – pozwala badaczom zdiagnozować i odróżnić pacjentów z PWS od tych z AS.
„Chociaż sekwencjonowanie DNA jest uważane za 'złoty standard’ dla badań przesiewowych mutacji, ta metodologia pozostaje stosunkowo droga, pracochłonna i czasochłonna”, napisali badacze.
W tym badaniu naukowcy opracowali metodę opartą na topnieniu o wysokiej rozdzielczości (HRM, technika, która pozwala badaczom odróżnić normalne i zmutowane sekwencje DNA na podstawie ich profilu topnienia). Jest to prosta, szybka, czuła, specyficzna i tania alternatywa dla sekwencjonowania DNA w celu diagnozowania i rozróżniania pacjentów z PWS i AS.
Aby przetestować i zwalidować nową metodę MS-HRM, naukowcy najpierw wyizolowali DNA z próbek krwi 43 pacjentów podejrzanych o posiadanie PWS lub AS. Następnie wykonali i porównali wyniki standardowej metody MS-PCR z nową metodą MS-HRM.
Wyniki testów wykazały, że MS-HRM i MS-PCR zgadzały się we wszystkich przypadkach, identyfikując 19 (44%) pacjentów z PWS, trzech (7%) z AS i 21 (49%) bez zmian.
Późniejsza hybrydyzacja fluorescencyjna in situ (FISH, technika pozwalająca badaczom na wizualizację specyficznych regionów chromosomów znakowanych sondą fluorescencyjną) wykonana na 19 (44%) pacjentach wykryła cztery przypadki PWS spowodowane delecją (gdzie część sekwencji DNA genu jest utracona) w chromosomie 15.
MS-HRM „nie wymaga dodatkowych technik, takich jak elektroforeza w żelu agarozowym, skracając czas potrzebny do uzyskania dokładnego wyniku i zmniejszając ryzyko zanieczyszczenia krzyżowego między próbkami”, napisali badacze.
„Czułość MS-HRM pozwala na wykrycie maleńkiej frakcji próbki jest ważna w analizie próbek, które są trudne do uzyskania zwłaszcza od noworodków hipotonicznych. Ponadto, wysoka odtwarzalność HRM sprawia, że metoda ta jest odpowiednia zarówno do zastosowań badawczych, jak i diagnostycznych w badaniach nad zespołami PWS i AS”, dodali.
„Szybka i dokładna diagnoza PWS lub AS pozwala na skuteczną interwencję farmakologiczną, unikając kilku cech charakterystycznych dla tych zaburzeń, zapewniając lepszą jakość życia”, podsumowali.
- Dane autora
.
Dodaj komentarz