Skąd mam wiedzieć, czy przeciwciało będzie reagować krzyżowo?

Reaktywność krzyżowa występuje, gdy przeciwciało wytworzone przeciwko jednemu określonemu antygenowi rozpoznaje dwa antygeny, które mają podobne regiony strukturalne.

Co to jest reaktywność krzyżowa?

Przeciwciało ma określoną sekwencję aminokwasów (region Fab), która dyktuje jego powinowactwo do określonego antygenu. Reaktywność krzyżowa między antygenami występuje, gdy przeciwciało wyhodowane przeciwko jednemu specyficznemu antygenowi ma konkurujące wysokie powinowactwo do innego antygenu. Dzieje się tak często, gdy dwa antygeny mają podobne regiony strukturalne, które rozpoznaje przeciwciało.

Reaktywność krzyżowa może unieważnić wyniki eksperymentu, a tym samym wpłynąć na odtwarzalność naukową. Dlatego testowanie przeciwciała pod kątem reaktywności krzyżowej z blisko spokrewnionymi białkami jest krytycznym eksperymentem walidacyjnym.

Jak sprawdzić reaktywność krzyżową?

Reaktywność krzyżowa nie zawsze jest cechą negatywną. Czasami może ona poprawić użyteczność przeciwciała. Na przykład, reaktywność krzyżowa przeciwciała dla celu w różnych gatunkach pozwala na stosowanie tego samego przeciwciała w wielu organizmach modelowych.

Reaktywność krzyżowa w różnych gatunkach często występuje w przypadku przeciwciał pochodzących od antygenów ludzkich. Wiele ludzkich przeciwciał w katalogu Proteintech ma znaczącą reaktywność krzyżową z homologicznymi białkami w modelach innych niż ludzkie, takich jak myszy, szczury, małpy lub zebrafish.

Based on the homology of a protein sequence and publications using our antibodies in non-human organisms, many of Proteintech’s antibodies can be used not only for human samples, but also for a variety of organisms. Homologię można ocenić przy użyciu wyrównania sekwencji para-wise immunogenu i antygenu docelowego za pomocą strony NCBI-BLAST, a dalsze informacje można sprawdzić na stronie internetowej Uniwersalnego zasobu białek UniProt.

Jaka jest „właściwa liczba” dla homologii, aby przewidzieć reaktywność krzyżową?

Bazując na naszym doświadczeniu, jeśli immunogen i sekwencja potencjalnie reagującego krzyżowo białka mają 75% homologii sekwencji, przewiduje się, że będą one reagować krzyżowo. Jeśli próbka nie pochodzi od człowieka, zaleca się stosowanie poliklonalnych, ponieważ rozpoznana jest mieszanina epitopów.

Czy moje przeciwciało reaguje krzyżowo z innymi gatunkami?

Zależy to od stopnia podobieństwa sekwencji białka pomiędzy immunogenem a sekwencją potencjalnie reagującego krzyżowo białka.

Jak uniknąć reaktywności krzyżowej w Western Blot

Jeśli to możliwe, zaleca się stosowanie przeciwciała wtórnego specyficznego dla pierwszego użytego przeciwciała; na przykład, jeśli przeciwciało pierwotne jest mysie, wówczas przeciwciałem wtórnym powinno być anty-mysie IgG-HRP. W przypadku, gdy przeciwciało drugorzędowe jest poliklonalne i generowane przeciwko całej cząsteczce IgG, wówczas przeciwciało królicze rozpoznające pierwotne mysie Ab może nie być najlepszym wyborem z powodu rozpoznawania wspólnego regionu łańcucha lekkiego Kappa.

Jak uniknąć reaktywności krzyżowej podczas eksperymentów barwienia immunologicznego

Reaktywność krzyżowa może wystąpić w testach barwienia immunologicznego z użyciem próbek pochodzących z tkanek; dlatego często stosuje się fragmenty, a nie całe IgG, jako pierwotne immunoglobuliny (na przykład podczas pracy z przeciwciałami mysimi na tkankach mysich). Dodatkowo, podczas wykonywania wielokrotnego barwienia, aby zapewnić, że nie ma reakcji krzyżowej, spróbuj użyć różnych przeciwciał drugorzędowych, na przykład 568 królicze anty-kozie z 488 królicze anty-mysie, które są dość powszechne i łatwe do znalezienia.

Co to jest adsorpcja krzyżowa przeciwciał drugorzędowych i reaktywność krzyżowa?

Cross-adsorbowane przeciwciała drugorzędowe to te przeciwciała poliklonalne, które są produkowane z dodatkowym etapem oczyszczania w celu odfiltrowania członków, które wiążą się z gatunkami immunoglobulin (IgG) poza celem. Proces ten może zmniejszyć reaktywność krzyżową gatunków i zwiększyć specyficzność. W zależności od konfiguracji eksperymentu istnieją odmiany przeciwciał drugorzędowych adsorbowanych krzyżowo i silnie adsorbowanych krzyżowo.

1. Przeciwciała poliklonalne vs. monoklonalne

2. Dobór przeciwciał wtórnych

3. Antygen białkowy czy peptydowy? Zalety i wady

4.