Genetics of Myasthenia Gravis: A Case-Control Association Study in the Hellenic Population

Abstract

Myasthenia gravis (MG) jest heterogenną chorobą autoimmunologiczną charakteryzującą się wytwarzaniem autoprzeciwciał przeciwko białkom błony postsynaptycznej w złączu nerwowo-mięśniowym. Udział czynników genetycznych w podatności na MG został oceniony w badaniach rodzinnych i bliźniaczych, jednak dokładne podłoże genetyczne choroby pozostaje nieuchwytne. Przeprowadziliśmy badanie asocjacyjne w 101 niespokrewnionych pacjentach z MG pochodzenia greckiego i 101 zdrowych ochotników, aby ocenić udział wspólnych wariantów genetycznych w podatności na MG. Skoncentrowaliśmy się na trzech genach kandydujących, które zostały wyraźnie powiązane z kilkoma chorobami autoimmunologicznymi, w celu zbadania ich potencjalnego wpływu na patogenezę MG. Są to: czynnik regulacyjny interferonu 5 (IRF-5), białko 3 indukowane TNFα (TNFAIP3), znane również jako A20, oraz interleukina-10 (IL-10), kluczowe cząsteczki w regulacji funkcji immunologicznych. Wykazano statystyczny trend asocjacji () pomiędzy polimorfizmami pojedynczych nukleotydów (SNPs) promotora IL-10 a podgrupami chorych na MG o wczesnym i późnym początku choroby. W pozostałych badanych wariantach nie zaobserwowano istotnych statystycznie różnic. O ile nam wiadomo, jest to pierwsza na świecie próba odpowiedzi na pytanie o możliwy związek pomiędzy wspólnymi wariantami genetycznymi IRF-5 i TNFAIP3 a genetycznym podłożem MG.

1. Wprowadzenie

Myasthenia gravis (MG) jest narządowo swoistą chorobą autoimmunologiczną spowodowaną autoprzeciwciałami skierowanymi przeciwko białkom błony postsynaptycznej, co prowadzi do upośledzenia transmisji nerwowo-mięśniowej. Klinicznie MG charakteryzuje się osłabieniem mięśni i szybkim zmęczeniem, nasilającym się podczas wysiłku i ustępującym po odpoczynku. Głównym autoantygenem, u 80-90% pacjentów z MG, jest mięśniowy receptor acetylocholinowy (AChR), pentameryczny kanał, który pośredniczy w transdukcji synaptycznej w złączu nerwowo-mięśniowym. U kilku z pozostałych pacjentów z MG wykrywa się autoprzeciwciała przeciwko mięśniowo-swoistej kinazie tyrozynowej (MuSK) lub białku 4 związanemu z lipoproteinami (LRP4). Zarówno MuSK jak i LRP4 tworzą kompleks receptorowy, który wiąże się z proteoglikanem macierzy zewnątrzkomórkowej agryną, co powoduje grupowanie AChR, krytyczne dla funkcji złącza nerwowo-mięśniowego.

Chociaż MG jest chorobą dotykającą obie płcie, we wszystkich grupach wiekowych i u wszystkich ras, dowody z kilku badań epidemiologicznych wykazały zależny od płci i wieku bimodalny rozkład częstości zachorowań, z jednym szczytem w drugiej i trzeciej dekadzie życia, obserwowanym głównie u kobiet, i drugim w szóstej i siódmej dekadzie życia, występującym głównie u mężczyzn. Powyższa obserwacja doprowadziła do klasyfikacji MG na MG o wczesnym początku, który pojawia się przed 50 rokiem życia i jest zwykle związany z hiperplazją grasicy oraz MG o późnym początku (>50 lat) z prawidłową lub zanikową grasicą.

Szeroki udział czynników genetycznych w podatności na MG został oceniony w badaniach rodzinnych i bliźniaczych, odzwierciedlających rodzinne występowanie choroby, a następnie dziedziczenie genetyczne. Wysokie wskaźniki zgodności MG obserwowane wśród bliźniąt monozygotycznych w porównaniu z bliźniętami dizygotycznymi silnie sugerują udział czynników genetycznych w patogenezie MG. Ponadto, w kilku badaniach wykazano, że u pacjentów z MG może występować inna choroba autoimmunologiczna, najczęściej zaburzenia tarczycy i reumatoidalne zapalenie stawów. To stwierdzenie prowadzi do hipotezy, że dochodzi do bardziej uogólnionych zaburzeń funkcji immunologicznych.

Kompleks ludzkich antygenów leukocytarnych (HLA) jest najważniejszym regionem genomowym mającym wpływ na wystąpienie MG. Allele HLA-A1 i B8 dla klasy I oraz DR3 dla klasy II tworzą haplotyp ancestralny określany jako „8.1”, który został odtworzony i powiązany z wczesnym początkiem MG i hiperplazją grasicy. Dalsze badania zmierzające do rozszyfrowania tego rozszerzonego haplotypu A1-B8-DR3 doprowadziły do zidentyfikowania locus MYAS1, regionu o wielkości 1,2 Mb obejmującego 36 genów, na granicy klasy III i proksymalnego regionu klasy I, wykluczając tym samym loci klasy II i potwierdzając przewagę allelu B8 nad DR3.

Oprócz HLA, zbadano również szereg niepowiązanych z HLA loci genetycznych pod kątem ich udziału w podatności na MG. Wyniki te pochodzą głównie z badań nad genami kandydującymi, a geny, które uznano za związane lub niezwiązane z MG są szczegółowo omówione w .

Interferon (IFN) regulatory factor 5 (IRF-5) jest członkiem rodziny IRF czynników transkrypcyjnych. IRF-5 jest aktywowany przez IFN-α/B i reguluje zestaw cytokin prozapalnych, takich jak IL-6, TNF-α i IL-12, podczas gdy dalej indukuje ekspresję genu IFN. Wyniki kilku badań, których przegląd znajduje się w artykule , sugerują, że IRF-5 jest genem podatności w SLE. Poszukiwanie wspólnych wariantów wpływających na poziom IRF-5 doprowadziło do zidentyfikowania SNP rs10954213 (c.*555G > A), zlokalizowanego w obrębie sekwencji sygnałowej poli-A+ AATAAA w 3′ UTR. Allel G zaburza miejsce poliadenylacji i transkrypcja zostaje zakończona daleko w dół, co prowadzi do powstania dłuższych i mniej stabilnych transkryptów mRNA IRF-5. Ponadto, 30-bp in-frame insertion-deletion variant (rs60344245) w szóstym eksonie IRF-5 warunkuje powstawanie dwóch rodzin izoform białka, które mają różną zdolność do inicjowania transkrypcji genów docelowych IRF-5.

Białko 3 indukowane TNFα (TNFAIP3), znane również jako A20, jest kluczową cząsteczką w regulacji ujemnego sprzężenia zwrotnego odpowiedzi zależnych od NF-κB. Hamujący wpływ TNFAIP3 na sygnalizację NF-κB jest generowany przez kooperatywną aktywność jego dwóch domen ubikwitynowych: N-końcowej domeny guza jajnika (OTU), odpowiedzialnej za deubikwitynację białka oddziałującego z receptorem 1 (RIP1), istotnego białka adaptorowego szlaku sygnalizacji indukowanego TNF, oraz C-końcowej domeny zawierającej palec cynkowy, która działa jako ligazy ubikwitynowe E3 promujące proteasomalną degradację RIP1.

SNP rs13207033 (g.137965418G > A), zlokalizowany w regionie intergenicznym 6q23, około 185 kb upstream od TNFAIP3, prawdopodobnie wpływa na ekspresję genu poprzez obecność potencjalnych elementów regulatorowych DNA . Inne badanie wykazało, że nonsynonimowy kodujący SNP (c.380T > G, rs2230926) powodujący zmianę fenyloalaniny na cysteinę w reszcie 127 (p.F127C), w domenie OTU białka TNFAIP3, jest związany z SLE u osób pochodzenia europejskiego.

Interleukina-10 (IL-10) jest plejotropową cytokiną wydzielaną przez różne typy komórek, takie jak komórki T i komórki linii mieloidalnej. IL-10 została scharakteryzowana jako cytokina przeciwzapalna ze względu na jej stymulujące działanie na komórki TH2 i jednoczesną supresję komórek TH1. Ponadto IL-10 indukuje proliferację i różnicowanie aktywowanych limfocytów B, co prowadzi do dalszej aktywacji odpowiedzi humoralnej. W doświadczalnym autoimmunologicznym MG (EAMG), podawanie IL-10 powodowało wzrost poziomu przeciwciał anty-AChR, co sugeruje chorobotwórczą rolę IL-10.

Wiele wariantów zostało zauważonych w 5′ sekwencji flankującej ludzkiego genu IL-10. Trzy SNPs, mianowicie, rs45552637 (A/C), rs1800872 (T/C), i rs1800896 (A/G), zlokalizowane odpowiednio w pozycjach -592, -819, i -1082, determinują powstawanie trzech haplotypów (GCC, ACC, i ATA). Położenie tych SNPs jest oparte na wcześniej opublikowanej sekwencji U16720, zdeponowanej w bazie EMBL-EBI. Badanie przeprowadzone przez Turnera i współpracowników wykazało korelację tych haplotypów z produkcją białka IL-10 in vitro. W szczególności, genotyp GCC/GCC był związany z wysoką produkcją IL-10 indukowaną konkanawaliną A, genotypy GCC/ACC i GCC/ATA ze średnią, a genotypy ACC/ACC, ATA/ATA i ACC/ATA z niską produkcją IL-10.

W obecnym badaniu przyjęto podejście oparte na hipotezie w celu oceny udziału niektórych wspólnych wariantów w podatności na MG. W związku z tym przeprowadziliśmy badanie kliniczno-kontrolne z udziałem genów kandydujących, koncentrując się na genach odgrywających kluczową rolę w funkcjonowaniu układu odpornościowego, dążąc do ustalenia, czy wcześniejsze doniesienia o związkach między tymi genami a innymi chorobami autoimmunologicznymi mogą być prawdziwe w przypadku MG.

2. Materiały i metody

2.1. Badana populacja

W badaniu wzięło udział 101 niespokrewnionych pacjentów z MG, wszyscy pochodzenia greckiego. Próbki krwi od pacjentów z MG zostały pobrane w Greckim Instytucie Pasteura podczas rutynowych badań diagnostycznych. Tylko AChR-dodatni pacjenci MG zostali włączeni do naszego badania. Rozpoznanie MG było oparte na obecności przeciwciał anty-AChR w surowicy pacjenta, przy użyciu testu radioimmunoprecypitacji (RIPA). Z analizy genetycznej celowo wyłączono tych pacjentów, u których stwierdzono obecność autoprzeciwciał przeciwko MuSK, aby zmniejszyć heterogenność badanej grupy. Chociaż surowice pacjentów z MG nie były analizowane pod kątem autoprzeciwciał anty-LRP4, brak tego testu nie budzi wątpliwości co do heterogenności badanej populacji, ze względu na rzadkie współistnienie przeciwciał anty-LRP4 i anty-AChR. Główną charakterystykę grupy MG anty-AChR (wiek w chwili zachorowania i płeć) przedstawiono w tabeli 1. Pacjenci wyrazili pisemną, świadomą zgodę na udział w badaniu. Grupa kontrolna składała się z 101 zdrowych osób dobranych pod względem etnicznym i płci.

2.2. Genotypowanie

Genomowe DNA od każdego osobnika było ekstrahowane z próbki obwodowej krwi żylnej przy użyciu zestawu QIAamp Blood Midi (Qiagen GmbH, Hilden, Niemcy). Łańcuchowe reakcje polimerazy (PCR) przeprowadzono przy użyciu zestawu KAPA2G Fast HotStart ReadyMix (KAPABIOSYSTEMS, Woburn, MA, USA). Sekwencje primerów przedstawiono w materiałach uzupełniających jako Supplementary Table 1 (patrz Tabela 1 w Supplementary Material dostępnym online pod adresem http://dx.doi.org/10.1155/2012/484919), natomiast warunki reakcji są dostępne na żądanie.

Amplikacja przez PCR i analiza elektroforezy w żelu agarozowym zostały wykorzystane do genotypowania wariantu 30 bp insercji/delecji IRF5.

PCR-based restriction fragment length polymorphism (RFLP) assay was used for the detection of SNP rs2230926 (T > G) in TNFAIP3. Amplifikowane fragmenty o długości 549 bp trawiono enzymem restrykcyjnym Fnu4HI (New England Biolabs, Ipswich, MA, USA), a następnie analizowano poprzez rozdział elektroforetyczny na 2% w/v żelu agarozowym. Allel G tworzy miejsce restrykcyjne Fnu4HI, co powoduje trawienie amplikonów do fragmentów 319 i 230 bp.

Identyfikację genotypów SNPs promotora IL-10 przeprowadzono metodą bezpośredniego sekwencjonowania DNA metodą Sangera. Fragment o długości 585 bp, zawierający wszystkie trzy warianty, amplifikowano metodą PCR. Produkty PCR oczyszczono za pomocą kolumnowego zestawu PureLink PCR Purification kit (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Sekwencję fragmentu 585 bp oznaczono przy użyciu zestawu BigDye Terminator chemistry v3.0 na sekwenatorze DNA Applied Biosystems (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA). Użyto tych samych starterów, co do amplifikacji tego regionu.

Oba SNPs, rs10954213 (A/G) w 3′ UTR IRF5 i rs13207033 (G/A) zlokalizowany w regionie intergenicznym 6q23, były genotypowane za pomocą PCR w czasie rzeczywistym i analizy krzywej topnienia o wysokiej rozdzielczości (HRM) na cykloergometrze czasu rzeczywistego RotorGene Q (Qiagen GmbH, Hilden, Niemcy). Amplifikacja fragmentu zawierającego interesujący nas SNP została przeprowadzona przy użyciu zestawu Type-it HRM PCR (Qiagen GmbH, Hilden, Niemcy), zgodnie z instrukcjami producenta. Podczas HRM temperatura wzrasta z 65 do 95°C, z szybkością grzania 0,1°C/2 s, co prowadzi do denaturacji produktów PCR i wygenerowania krzywych topnienia, charakterystycznych dla każdego genotypu. Ponieważ zmiana pojedynczej pary zasad powoduje znaczące przesunięcie temperatury topnienia (), genotypowanie opiera się na analizie profili topnienia: homozygoty dla allelu A wykazują podobne profile topnienia i z niższym , w porównaniu z homozygotami G/G, podczas gdy heterozygoty są rozróżniane przez zmianę kształtu krzywej topnienia.

Nie szablonowe kontrole zostały skrupulatnie włączone do wszystkich procesów genotypowania. Negatywne i pozytywne próbki kontrolne zostały wstępnie zidentyfikowane przez sekwencjonowanie DNA, a następnie zostały wykorzystane we wszystkich metodach genotypowania. Każda próbka była badana w duplikacie, z wyjątkiem tych analizowanych przez PCR-RFLP i sekwencjonowanie DNA.

2.3. Analiza statystyczna

Różnice w rozkładzie genotypów i częstości alleli między przypadkami i kontrolami obliczono za pomocą analizy lub testu Fishera’s Exact. wartości mniejsze niż 0,05 uznano za istotne statystycznie.

3. Wyniki

Rozkłady genotypów wszystkich wariantów były zgodne z równowagą Hardy’ego-Weinberga zarówno w grupie pacjentów z MG, jak i w grupie kontrolnej (dane nie pokazane).

Częstości alleli i genotypów wariantu IRF-5 rs60344245 wykazały zbliżony rozkład w badanych grupach 101 pacjentów MG i 100 kontroli (). Jeśli chodzi o IRF-5 rs10954213 SNP, genotyp A/G występował nieco częściej u pacjentów z MG niż w grupie kontrolnej (54,8% versus 45,5%), ale analiza nie wykazała istotnych różnic (). Częstości alleli i genotypów obu wariantów IRF-5 przedstawiono w tabeli 2.

Wiek wystąpienia choroby oceniono również dzieląc pacjentów z MG na pacjentów o wczesnym i późnym początku choroby. Nie wykryto istotnych różnic w dystrybucji genotypów pomiędzy tymi dwiema podgrupami a grupą kontrolną (dane nie pokazane).

Analiza sekwencji DNA regionu promotorowego IL-10 wykazała, że genotyp ACC/GCC był najczęściej obserwowanym genotypem zarówno u pacjentów z MG, jak i w grupie kontrolnej (23,72% i 28%, odpowiednio), a następnie genotyp niskiej sekrecji ATA/ACC, który został wykryty u 21,62% wszystkich MG i 18% kontroli (Tabela 4). W obecnym badaniu nie wykazano jednak istotnej statystycznie różnicy w dystrybucji genotypów IL-10 pomiędzy pełną kohortą pacjentów z MG (tj. całkowitą MG) a grupą kontrolną (). Porównanie podgrup w zależności od wieku zachorowania wykazało, że genotyp GCC/GCC o wysokiej sekrecji IL-10 występuje z niską częstością w MG o wczesnym początku (4%), natomiast jest nadreprezentowany w przypadkach MG o późnym początku (20%) (tab. 4). Wykazano statystyczny trend asocjacji () pomiędzy rozkładem fenotypu IL-10 a dwiema podgrupami o wczesnym i późnym początku choroby (ryc. 1).

Fenotyp Genotypy Ogółem MG (%)a Wczesny początek (%)b Późny początek (%)b Kontrola (%)a Wysoka ekspresja IL-10 expression GCC/GCC 11 (11.32) 2 (4.0) 9 (20.0) 13 (13.0) Średnia ekspresja IL-10 ACC/GCC 23 (23.72) 12 (27.0) 10 (23.0) 28 (28.0) ATA/GCC 24 (24.72) 13 (29.0) 9 (20.0) 17 (17.0) Niska ekspresja IL-10 ACC/ACC 12 (12.42) 5 (11.0) 6 (14.0) 15 (15.0) ATA/ATA 6 (6.2) 4 (9.0) 2 (5.0) 9 (9.0) ATA/ACC 21 (21.62) 9 (20.0) 8 (18.0) 18 (18.0)

aAnaliza nie powiodła się dla podzbioru próbek. bEight MG samples were of unknown age at onset.

Tabela 4

Częstotliwości genotypówIL-10 w pełnej kohorcie pacjentów z MG (tj, całkowitej MG), podgrupach MG o wczesnym i późnym początku oraz w grupie kontrolnej.

Rycina 1

Rozkład fenotypówIL-10 w podgrupach pacjentów z MG o wczesnym i późnym początku.

4. Dyskusja

MG jest heterogenną chorobą autoimmunologiczną z wyraźną predyspozycją genetyczną. Oprócz loci HLA, kilka wspólnych wariantów w genach niepowiązanych z HLA zostało powiązanych z podatnością na MG. Wiele z tych genów związanych z ryzykiem jest szeroko rozpowszechnionych wśród różnych chorób autoimmunologicznych, co potwierdza tezę, że choroby autoimmunologiczne charakteryzują się wspólnymi szlakami patogenetycznymi. W niniejszej pracy przeprowadziliśmy badanie asocjacyjne typu case-control w celu zbadania udziału wspólnych wariantów zlokalizowanych w genach IRF-5, TNFAIP3 i IL-10 w podatności na MG. Geny te zostały uznane za dobrych kandydatów ze względu na ich krytyczną rolę w regulacji odpowiedzi immunologicznej i ich wcześniej znany udział w procesie autoimmunologicznym. Tylko pacjenci z przeciwciałami anty-AChR w surowicy zostali włączeni do analizy genetycznej, ponieważ spodziewano się, że reprezentują oni bardziej jednorodny podzbiór niż szersza grupa MG. Podgrupa ta została następnie podzielona na dwie odrębne jednostki chorobowe: pacjentów z MG o wczesnym początku, obejmujących głównie kobiety, i pacjentów z MG o późnym początku, wykazujących wyższy odsetek mężczyzn.

O ile nam wiadomo, jest to pierwsze badanie, w dowolnej populacji, w celu zbadania związku między MG a wspólnymi wariantami genów IRF-5 i TNFAIP3. Według poprzednich badań, przejrzanych w , kilka wariantów w locus IRF-5 było powtarzalnie związanych z SLE implikując IRF-5 jako gen podatności w toczniu. Stwierdzono, że SNP rs10954213 wpływa na poliadenylację mRNA, a tym samym upośledza poziom białka IRF-5; homozygoty A/A wykazują około 5-krotnie wyższy poziom immunoreaktywnego IRF-5 w porównaniu z homozygotami G/G. W przypadku wariantu rs60344245, delecja 30 bp (GGCCGCCTACTCTGCAGCCGCCCACTCTGC/-) usuwa 10 aminokwasów z białka IRF-5 i zmienia domenę bogatą w prolinę, kwas glutaminowy, serynę i treoninę (PEST). W rodzinie białek IRF domeny takie uczestniczą w interakcjach białkowych, a także powodują szybką degradację proteolityczną. Pomimo ich oczywistej roli funkcjonalnej, obecne badanie nie wykazało znaczącego związku wariantów IRF-5 rs10954213 i rs60344245 z MG (i , odpowiednio), co sugeruje, że IRF-5 może nie być zaangażowany w patogenezę MG.

Co więcej, ostatnie ustalenia z badań GWA ujawniły znaczące związki między wariantami w ludzkim locus TNFAIP3 i szerokim spektrum chorób autoimmunologicznych. Skan GWA pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów, z przeciwciałami przeciwko peptydom antycytrulinowym, wykrył silne dowody na asocjację rs13207033 SNP z rozwojem RZS . Podobnie, badanie przeprowadzone przez Musone i współpracowników wykazało związek nonsynonimowego kodującego SNP, rs2230926 z SLE . Badania funkcjonalne mające na celu określenie biologicznego wpływu rs2230926 wykazały, że białko minor Cys127 wykazuje zmniejszoną aktywność hamującą. Jednak brak asocjacji zaobserwowano między MG a TNFAIP3 rs13207033 () i rs2230926 () SNPs.

W sumie nasze dane mogą wskazywać, że specyficzne dla narządów MG może mieć inne tło genetyczne prowadzące do jego oddzielenia od szerokiego klastra systemowych chorób autoimmunologicznych obejmujących SLE i RA . Alternatywne wyjaśnienie braku asocjacji w naszym badaniu może być związane z niewystarczającą mocą statystyczną wynikającą z relatywnie małej liczebności próby. Jak powszechnie wiadomo, wspólne warianty stanowią skromną część ryzyka genetycznego dotyczącego chorób autoimmunologicznych. W takich przypadkach mogą być wymagane tysiące próbek w celu wykrycia sygnału asocjacyjnego, który może być odróżniony od szumu tła. Jednak w przypadku chorób o niskiej częstości występowania, takich jak MG, rekrutacja dużych prób jest bardzo trudna. Warto wspomnieć, że jednostka diagnostyczna MG w Hellenic Pasteur Institute jest jedyną jednostką w Grecji, która systematycznie otrzymuje i analizuje próbki krwi od 1983 roku. Dlatego też nasza kolekcja próbek DNA MG jest obecnie największa w Grecji i jest stale wzbogacana o nowe przypadki.

Ponadto, pomimo specyficznej selekcji pacjentów z anty-AChR i ich podziału na wczesny i późny początek, dalsza klasyfikacja według anomalii grasicy (grasiczak lub hiperplazja) mogłaby być informatywna; jednakże dane histologiczne nie były dostępne.

Nieoczekiwanym wynikiem był brak asocjacji SNPs promotora IL-10 z MG. Ponieważ przypuszcza się, że warianty te leżą w regionie promotora IL-10, mogą one wpływać na wiązanie czynników transkrypcyjnych, które regulują ekspresję IL-10. Ostatnie badania Alseth i współpracowników, przeprowadzone na populacji norweskiej, wykazały związek genotypu ACC/ACC z podgrupą pacjentów z MG z dodatnimi przeciwciałami cytynowymi, podczas gdy istotnie statystycznie zwiększona częstość ATA/ATA została zaobserwowana u pacjentów z MG o wczesnym początku choroby. W naszej grupie helleńskich pacjentów z MG nie wykryto dowodów na istnienie asocjacji, gdy porównaliśmy rozkład genotypów pomiędzy pełną kohortą pacjentów z MG a grupą kontrolną (). Jednakże, genotyp GCC/GCC ujawnił statystyczny trend asocjacji z MG, w odrębnych podgrupach pacjentów z MG o wczesnym i późnym początku (). Tak więc dalsze badania na większych próbach mogłyby ujawnić ewentualne związki MG z IL-10. Na uwagę zasługuje również fakt, że częstości alleli dla danego SNP mogą się istotnie różnić w różnych grupach etnicznych. Różnica zauważona w częstości genotypu ACC/ACC pomiędzy norweską i hellenistyczną grupą kontrolną (3,4% versus 15%) jest odzwierciedleniem tego warunku.

Ogółem, jest to pierwszy wysiłek, według naszej wiedzy, aby zająć się możliwym związkiem między wspólnymi wariantami genetycznymi IRF-5 i TNFAIP3 a genetycznym podłożem MG, w dowolnej populacji, podczas gdy dalsze badania są potrzebne, aby rozwikłać, jeszcze w dużej mierze nieznane, genetyczne tło MG.

Podziękowania

Autorzy są wdzięczni pacjentom z MG i ochotnikom, którzy uczestniczyli w naszym badaniu. Anna Kokla i Maria Belimezi z Greckiego Instytutu Pasteura są wdzięczne za pomoc w zbieraniu próbek od pacjentów z MG. Obecne badanie było wspierane finansowo przez granty Komisji Europejskiej Fight MG dla S. J. Tzartosa i GEN2PHEN (FP7-200754) dla G. P. Patrinosa, z udziałem funduszy z projektu Thales (Autoimmunologia) dla S. J. Tzartosa i K. Poulasa oraz projektu Hellas/Turkey Bilateral Collaboration (MuSK-myasthenia gravis) dla K. Poulas.

Materiały Uzupełniające

Materiały Uzupełniające zawierają Tabelę Uzupełniającą 1, która zawiera informacje o starterach do amplifikacji PCR każdego wariantu i jego sekwencji flankującej.

1. Tabela Uzupełniająca

.