O que é Espectroscopia de Fluorescência?

O que é um Espectro de Fluorescência?

Fig. 1: Um espectro de excitação de fluorescência (azul) e um espectro de emissão (roxo) são imagens espelhadas uma da outra

Espectros de fluorescência de estado estável são quando moléculas, excitadas por uma fonte de luz constante, emitem fluorescência, e os fótons emitidos, ou intensidade, são detectados em função do comprimento de onda. Um espectro de emissão de fluorescência é quando o comprimento de onda de excitação é fixo e o comprimento de onda de emissão é escaneado para obter um gráfico de intensidade vs. comprimento de onda de emissão.

Um espectro de excitação de fluorescência é quando o comprimento de onda de emissão é fixo e o comprimento de onda monocromador de excitação é escaneado. Desta forma, o espectro dá informações sobre os comprimentos de onda em que uma amostra irá absorver de modo a emitir no único comprimento de onda de emissão escolhido para observação. É análogo ao espectro de absorção, mas é uma técnica muito mais sensível em termos de limites de detecção e especificidade molecular. Os espectros de excitação são específicos de um único comprimento de onda/espécie emissora, em oposição a um espectro de absorção, que mede todas as espécies absorventes em uma solução ou amostra. Os espectros de emissão e de excitação para um determinado fluoróforo são imagens espelhadas uns dos outros. Tipicamente, o espectro de emissão ocorre em comprimentos de onda maiores (menor energia) do que o espectro de excitação ou absorvância.

Estes dois tipos espectrais (emissão e excitação) são usados para ver como uma amostra está mudando. A intensidade espectral e/ou o pico de comprimento de onda podem mudar com variantes como temperatura, concentração ou interações com outras moléculas ao seu redor. Isto inclui moléculas de têmpera e moléculas ou materiais que envolvem transferência de energia. Alguns fluoróforos também são sensíveis às propriedades do ambiente solvente, tais como pH, polaridade e certas concentrações de íons.