Hoe weet ik of het antilichaam een kruisreactie zal veroorzaken?

Kruisreactiviteit treedt op wanneer een antilichaam dat tegen één specifiek antigeen is opgekomen, twee antigenen herkent die soortgelijke structurele gebieden hebben.

Wat is kruisreactiviteit?

Een antilichaam heeft een specifieke aminozuursequentie (de Fab-regio) die zijn affiniteit voor een specifiek antigeen bepaalt. Kruisreactiviteit tussen antigenen treedt op wanneer een antilichaam dat tegen één specifiek antigeen is opgekomen een concurrerende hoge affiniteit heeft voor een ander antigeen. Dit is vaak het geval wanneer twee antigenen gelijkaardige structurele regio’s hebben die het antilichaam herkent.

Kruisreactiviteit kan de resultaten van een experiment ongeldig maken en zo de wetenschappelijke reproduceerbaarheid beïnvloeden. Daarom is het testen van een antilichaam op kruisreactiviteit met nauw verwante eiwitten een kritisch validatie-experiment.

Hoe controleer ik kruisreactiviteit?

Kruisreactiviteit is niet altijd een negatieve eigenschap. Het kan soms de bruikbaarheid van een antilichaam verbeteren. Bijvoorbeeld, kruisreactiviteit van een antilichaam voor een doelwit in verschillende soorten maakt het mogelijk om hetzelfde antilichaam in meerdere modelorganismen te gebruiken.

Kruisreactiviteit in verschillende soorten komt vaak voor bij antilichamen die zijn afgeleid van menselijke antigenen. Veel menselijke antilichamen in de Proteintech-catalogus hebben een significante kruisreactiviteit met de homologe eiwitten in niet-menselijke modellen, zoals muis, rat, aap of zebravis.

Gebaseerd op de homologie van een eiwitsequentie en publicaties met behulp van onze antilichamen in niet-menselijke organismen, kunnen veel van Proteintech’s antilichamen niet alleen worden gebruikt voor menselijke monsters, maar ook voor een verscheidenheid aan organismen. Homologie kan worden vastgesteld met behulp van een paarsgewijze sequentie-uitlijning van immunogeen en doelantigeen via de NCBI-BLAST-website, en verdere informatie kan worden gecontroleerd op de Universal Protein resource website UniProt.

Wat is het “juiste getal” voor homologie om kruisreactiviteit te voorspellen?

Gebaseerd op onze ervaring, als het immunogeen en de sequentie van het potentieel kruisreactieve eiwit 75% sequentiehomologie delen, wordt voorspeld dat het kruisreageert. Als uw monster niet-menselijk is, wordt een polyklonaal aanbevolen omdat er een mengsel van herkende epitopen is.

Kruist mijn antilichaam met andere soorten?

Het hangt af van de mate van eiwitsequentiegelijkenis tussen het immunogeen en de potentiële kruisreactieve eiwitsequentie.

Hoe kruisreactiviteit te vermijden in western blot

Indien mogelijk, is het aanbevolen om het secundaire antilichaam te gebruiken dat specifiek is voor het eerste gebruikte antilichaam; bijvoorbeeld, als het primaire antilichaam muis is, dan moet het secundaire antilichaam anti-muis IgG-HRP zijn. Als het secundaire antilichaam polyklonaal is en tegen het hele IgG-molecuul is gegenereerd, dan is konijn-antilichaam dat het primaire muis-ab herkent misschien niet de beste keuze vanwege de herkenning van het gemeenschappelijke Kappa Light Chain-gebied.

Hoe kruisreactiviteit te vermijden tijdens immunokleuringsexperimenten

Kruisreactiviteit kan optreden bij immunokleuringstests met weefselafgeleide monsters; daarom is het gebruikelijk om fragmenten, in plaats van hele IgG’s, te gebruiken als primaire immunoglobulinen (bijvoorbeeld bij het werken met muisantilichamen op muisweefsels). Bovendien, terwijl het doen van een meervoudige kleuring, om ervoor te zorgen dat er geen kruisreactie, probeer om verschillende secundaire antilichamen te gebruiken, bijvoorbeeld, 568 konijn anti-geit met een 488 konijn anti-muis, die zijn heel gebruikelijk en gemakkelijk te vinden.

Wat is de secundaire antilichaam cross-adsorptie en kruisreactiviteit?

Cross-adsorbed secundaire antilichamen zijn die polyklonale antilichamen die worden vervaardigd met een extra zuiveringsstap om leden uit te filteren die zich binden aan off-target soorten van immunoglobuline (IgG). Dit proces kan de kruisreactiviteit tussen de soorten verminderen en de specificiteit verhogen. Afhankelijk van de opzet van het experiment zijn er kruislings geadsorbeerde en sterk kruislings geadsorbeerde secundaire antilichaamvariëteiten.

1. Polyklonale vs. monoklonale antilichamen

2. Selectie van secundaire antilichamen

3. Eiwit- of peptide-antigeen? Voor- en nadelen