Enzyme Activity Assay

Het overgrote deel van de katalytische biologische processen wordt uitgevoerd door enzymen, die in levende organismen een grote verscheidenheid aan functies vervullen. Zij zijn onmisbaar voor metabolische processen, cellulaire signalering en regulering en kunnen beweging en actief transport van moleculen tot stand brengen. Enzymatische reacties zetten substraatmoleculen specifiek om in chemisch gewijzigde producten. Deze modificaties omvatten proteolytische of glycolytische afbraak, chemische modificaties zoals fosforylering, acylering, glycosylering of oxidatieve en reductieve processen. Ontregelde enzymactiviteit kan leiden tot ziektes. Daarom worden enzymen beschouwd als aantrekkelijke doelwitten voor farmacologische interventie bij de behandeling van geneesmiddelen.

Onze decennialange ervaring met het ontwerpen en vervaardigen van actieve enzymen en hun substraten ondersteunt de ontwikkeling van een steeds uitgebreider portfolio van biochemische assays. Wij leveren diensten op het gebied van enzymatische analyses om wetenschappers te helpen die zich richten op onderzoek naar enzymen en eiwitten:

• Kinetische evaluatie van enzymactiviteit en remming.
• Remmerscreening en -validatie.
• IC50-bepaling van geneesmiddelverbindingen.
• Enzym-remmingsstudies die het werkingsmechanisme analyseren.
• Onderzoek naar de omkeerbaarheid van enzymremming.
• Substraatprofilering die de selectiviteit van enzymen analyseert.

Onze enzymactiviteitstests omvatten eerst de immunocapture van het eiwit van interesse, gevolgd door meting van de substraat- of productomzet. Hierbij worden alleen monoklonale antilichamen gebruikt die zijn gescreend om het enzym in actieve vorm te isoleren en in complexen die waarschijnlijk hun associaties in situ vertegenwoordigen. Er zijn vele voordelen. Het enzym wordt gescheiden van andere eiwitten die dezelfde gescreende substraten of producten gebruiken of produceren en dit maakt eenvoudige tests mogelijk zoals het gebruik van ATP, NADH, pyruvaat enz., die in vivo aan meervoudige reacties onderhevig zijn. Voor de meeste enzymen waarvoor wij activiteitsbepalingskits hebben, leveren wij ook kwantitatieve Sandwich ELISA-tests. Door de twee te combineren is het mogelijk specifieke activiteitsgegevens te genereren. Bovendien kunnen, omdat het enzym van andere cellulaire componenten is gescheiden, de posttranslationele modificaties (PTM’s) die het op het tijdstip van de bepaling bevat, worden gemeten, bv. door latere massaspectrometrie of reactie op PTM-specifieke antilichamen.