Diagnosetest voor Angelman en Prader-Willi is snel, nauwkeurig en minder duur
On januari 5, 2022 by adminOnderzoekers hebben een nieuwe snelle en nauwkeurige moleculaire diagnosetest ontwikkeld voor patiënten met het Angelman- of Prader-Willi-syndroom.
Hun studie, “A rapid and accurate methylation-sensitive high-resolution melting analysis assay for the diagnosis of Prader Willi and Angelman patients,” is gepubliceerd in Molecular Genetics & Genomic Medicine.
Prader-Willi (PWS) en Angelman (AS) syndromen zijn twee zeldzame genetische aandoeningen die worden veroorzaakt door inprentingsdefecten in dezelfde regio van chromosoom 15. Terwijl PWS wordt geassocieerd met functieverlies van vaderlijke genen, wordt Angelman veroorzaakt door functieverlies van maternale genen. Genomic imprinting is het proces waarbij één kopie van een gen, hetzij de maternale hetzij de vaderlijke kopie, wordt uitgeschakeld door een chemische DNA-modificatie genaamd methylering.
“De laboratoriumdiagnose van PWS en AS is een uitdaging en vereist verschillende moleculaire en cytogenetische methoden om het genetische mechanisme op te helderen dat leidt tot de ontwikkeling van het syndroom,” schreven de onderzoekers.
Analyses van DNA-methyleringspatronen in een specifieke regio van chromosoom 15 – bekend als de SNURF-SNRPN-locus door methyleringsspecifieke polymerasekettingreactie (MS-PCR, een techniek die veranderingen in DNA-methylering in specifieke regio’s van een DNA-sequentie detecteert) – stelt onderzoekers in staat om patiënten met PWS te diagnosticeren en te onderscheiden van die met AS.
“Hoewel DNA-sequencing wordt beschouwd als de ‘gouden standaard’ voor mutatiescreening, blijft deze methodologie relatief duur, bewerkelijk en tijdrovend,” schreven de onderzoekers.
In deze studie ontwikkelden wetenschappers een methode op basis van smelten met hoge resolutie (HRM, een techniek die onderzoekers in staat stelt om onderscheid te maken tussen normale en gemuteerde DNA-sequenties op basis van hun smeltprofiel). Het is een eenvoudig, snel, gevoelig, specifiek en goedkoop alternatief voor DNA-sequencing om PWS- en AS-patiënten te diagnosticeren en te onderscheiden.
Om de nieuwe MS-HRM-methode te testen en te valideren, isoleerden de onderzoekers eerst DNA uit bloedmonsters van 43 patiënten van wie vermoed werd dat ze ofwel PWS ofwel AS hadden. Vervolgens voerden ze de resultaten van de standaard MS-PCR uit en vergeleken die met de nieuwe MS-HRM-methode.
De testresultaten toonden aan dat MS-HRM en MS-PCR in alle gevallen overeenkwamen, waarbij 19 (44%) patiënten met PWS werden geïdentificeerd, drie (7%) met AS, en 21 (49%) zonder veranderingen.
Subsequent fluorescentie in situ hybridisatie (FISH, een techniek die onderzoekers in staat stelt om specifieke regio’s van chromosomen te visualiseren gelabeld met een fluorescerende probe) uitgevoerd op 19 (44%) patiënten ontdekte vier gevallen van PWS veroorzaakt door een deletie (waar een deel van de DNA-sequentie van een gen verloren gaat) in chromosoom 15.
De MS-HRM “vereist geen aanvullende technieken zoals agarose gelelektroforese, waardoor de tijd die nodig is om een nauwkeurig resultaat te verkrijgen wordt verkort en de risico’s van kruisbesmetting tussen monsters worden verminderd,” schreven de onderzoekers.
“De gevoeligheid van MS-HRM maakt de detectie van een minuscule fractie van het monster mogelijk, wat belangrijk is bij de analyse van monsters, die moeilijk te verkrijgen zijn, vooral van pasgeboren hypotone zuigelingen. Bovendien maakt de hoge reproduceerbaarheid van HRM deze methode geschikt voor zowel onderzoek als diagnostische toepassingen in de studie van PWS en AS syndromen,” voegden ze eraan toe.
“Een snelle en accurate diagnose van PWS of AS maakt een effectieve medicamenteuze interventie mogelijk, waarbij verschillende kenmerken van deze aandoeningen worden vermeden en een betere kwaliteit van leven wordt geboden,” concludeerden ze.
- Auteursdetails
Geef een antwoord