Luciferase Assays

Entendendo como um promotor ou elemento de resposta pode controlar a expressão gênica é mais fácil quando estudado com um gene repórter. As enzimas luciferase são ideais para ensaios de repórter com detecção simples à base de luz e alta sensibilidade que podem quantificar até mesmo pequenas mudanças na expressão. Embora os ensaios de repórter sejam frequentemente usados para avaliar mudanças na atividade do promotor, eles também podem ser usados para investigar a transdução de sinal, função da proteína, regulação do miRNA e até mesmo medição em tempo real de processos em organismos vivos.

A base de um ensaio de repórter é o vetor, que carrega o gene repórter, e os reagentes de detecção que fornecem um substrato para converter a atividade da enzima luciferase em um sinal de luz. Os reagentes de detecção de dupla luciferase apagam o primeiro sinal do repórter antes de ler o segundo para permitir que dois repórteres sejam medidos sequencialmente a partir da mesma amostra. O segundo repórter é freqüentemente incluído como um controle interno para dados mais precisos.

Após a seleção do vetor repórter e qualquer elemento clonado (se necessário), o vetor é introduzido em células cultivadas, tipicamente usando métodos baseados em transfecção, expressos e atividade detectada com reagentes líticos (ponto final) ou reagentes de células vivas para medir alterações nas mesmas células ao longo do tempo. Os ensaios do Luciferase reportter podem ser multiplexados com outros ensaios para avaliar a apoptose, metabolismo e muito mais. A medição dos ensaios de luciferase é tipicamente realizada usando um luminómetro em placa.