Luciferase Assays

プロモーターやレスポンスエレメントがどのように遺伝子発現を制御しているかを知るには、レポーター遺伝子で調べると簡単である。 ルシフェラーゼ酵素は、光を使った簡単な検出と、わずかな発現変化も定量できる高い感度を持ち、レポーターアッセイに理想的な酵素である。 レポーターアッセイはプロモーター活性の変化を評価するために用いられることが多いが、シグナル伝達、タンパク質機能、miRNAの制御、さらには生体内のプロセスのリアルタイム測定にも利用できる。

レポーターアッセイの基本はレポーター遺伝子を搭載するベクターと、ルシフェラーゼ酵素の活性を光信号に変換する基質を提供する検出試薬にある。 デュアルルシフェラーゼ検出試薬は、1つ目のレポーターのシグナルを消光してから2つ目のシグナルを読み出すことで、同一サンプルから2つのレポーターを連続的に測定することが可能である。

レポーターベクターを選択し、必要な要素をクローニングしたら、通常はトランスフェクションに基づく方法でベクターを培養細胞に導入し、発現させて活性を検出し、溶解（エンドポイント）試薬または同じ細胞の時間的変化を測定するライブセル試薬で測定する。 ルシフェラーゼレポーターアッセイは、アポトーシスや代謝などを評価するために他のアッセイとマルチプレックスすることができる。 ルシフェラーゼアッセイの測定は、通常、プレートベースのルミノメーターで行われます。