抗体が交差反応を起こすかどうかは、どうすれば分かりますか？

交差反応は、ある特定の抗原に対して産生された抗体が、類似の構造領域を持つ2つの抗原を認識したときに起こります。

交差反応とは何ですか？

抗体は特定のアミノ酸配列（Fab領域）により、特定の抗原に対する親和性が規定されています。 ある特定の抗原に対して産生された抗体が、別の抗原に対して競合的に高い親和性を示す場合、抗原間の交差反応性が生じます。 これは、2つの抗原が、抗体が認識する類似の構造領域を持つ場合によく起こります。

交差反応性は、実験結果を無効にしてしまい、科学的再現性に影響を与える可能性があります。 したがって、近縁のタンパク質との交差反応について抗体をテストすることは、重要なバリデーション実験です。

交差反応の確認方法は？ 時には抗体の有用性を向上させることができます。 例えば、ある標的に対する抗体の種を超えた交差反応性は、同じ抗体を複数のモデル生物に使用することを可能にします。

種を超えた交差反応は、ヒト抗原由来の抗体でしばしば起こります。 Proteintechのカタログに掲載されている多くのヒト抗体は、マウス、ラット、サル、ゼブラフィッシュなどの非ヒトモデルにおける同種のタンパク質と大きな交差反応性を有しています。

タンパク質配列の相同性、および非ヒト生物における当社抗体を用いた論文に基づき、Proteintech社の多くの抗体は、ヒト試料だけでなく、様々な生物に使用することが可能です。 相同性は、NCBI-BLASTwebsiteで免疫原と標的抗原の一対一の配列アライメントで評価することができ、さらに詳しい情報はUniversal Protein resource website UniProtで確認することが可能である。

交差反応性を予測するための相同性の「正しい数値」とは？

これまでの経験から、免疫原と交差反応性タンパク質の配列が75％の配列相同性を有していれば、交差反応が予測されます。 381>

抗体は他の生物種と交差反応しますか？

免疫原と交差反応性タンパク質の配列がどの程度類似しているかによります。

ウェスタンブロットにおける交差反応性の回避方法

可能であれば、使用する一次抗体に特異的な二次抗体を使用することをお勧めします；例えば、一次抗体がマウスの場合、二次抗体は抗マウスIgG-HRPを使用することが必要です。 二次抗体がIgG分子全体に対して生成されるポリクローナル抗体の場合、共通のKappa Light Chain領域を認識するため、マウス一次抗体を認識するウサギ抗体は最適な選択とはならない場合があります。

免疫染色実験時の交差反応回避方法

組織由来のサンプルを用いた免疫染色実験では、交差反応が生じることがあります。したがって、一次免疫グロブリンとしてIgG全体ではなく、断片を用いることが一般的です（例えば、マウス組織に対してマウス抗体を用いる場合など）。 また、多重染色を行う際には、交差反応がないように、例えば、568ウサギ抗ヤギと488ウサギ抗マウスなど、一般的で入手しやすい二次抗体を使い分けるようにします。

二次抗体の交差吸着と交差反応性とは何ですか？

交差吸着二次抗体は、標的外の免疫グロブリン（IgG）種に結合するメンバーを除去するために、精製工程を追加して製造されるポリクローナル抗体のことです。 この工程を経ることにより、交差反応性を低減し、特異性を高めることができる。 実験のセットアップにより、交差吸着型と高交差吸着型の2次抗体があります。

1. ポリクローナル抗体とモノクローナル抗体の比較

2. 二次抗体の選択

3. タンパク質抗原かペプチド抗原か

4. メリットとデメリット

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