Saggio di attività enzimatica

La stragrande maggioranza dei processi biologici catalizzatori è eseguita da enzimi che forniscono un’ampia varietà di funzioni all’interno degli organismi viventi. Sono indispensabili per i processi metabolici, la segnalazione e la regolazione cellulare e possono generare movimento e trasporto attivo di molecole. Le reazioni enzimatiche convertono specificamente le molecole di substrato in prodotti chimicamente modificati. Queste modifiche includono la degradazione proteolitica o glicolitica, modifiche chimiche come fosforilazione, acilazione, glicosilazione o processi ossidativi e riduttivi. L’attività enzimatica disregolata può portare a stati patologici. Di conseguenza, gli enzimi sono considerati obiettivi attraenti per l’intervento farmacologico nella terapia farmacologica.

La nostra decennale esperienza nella progettazione e produzione di enzimi attivi e dei loro substrati supporta lo sviluppo di un portafoglio in continua espansione di saggi biochimici. Forniamo servizi sui saggi enzimatici per assistere gli scienziati concentrati sulla ricerca di enzimi e proteine:

• Valutazione cinetica dell’attività enzimatica e dell’inibizione.
• Selezione e convalida degli inibitori.
• Determinazione dell’IC50 dei composti di farmaci.
• Studi sugli inibitori enzimatici che analizzano il modo di azione
• Indagini sulla reversibilità dell’inibizione enzimatica
• Profilo del substrato che analizza la selettività degli enzimi

I nostri saggi di attività enzimatica coinvolgono l’immunocattura della proteina di interesse seguita dalla misurazione del turnover del substrato o del prodotto. Questi impiegano solo anticorpi monoclonali che sono stati selezionati per isolare l’enzima in forma attiva e in complessi che probabilmente rappresentano le loro associazioni in situ. Ci sono molti vantaggi. L’enzima è separato da altre proteine che usano o producono gli stessi substrati o prodotti sottoposti a screening e questo permette saggi semplici come l’utilizzo di ATP, NADH, piruvato e così via, che sono soggetti a reazioni multiple in vivo. Per la maggior parte degli enzimi per i quali disponiamo di kit di saggio di attività, forniamo anche saggi ELISA Sandwich di quantità. Combinando i due, è possibile generare dati di attività specifici. Inoltre, poiché l’enzima è separato da altri componenti cellulari, le modifiche post-traslazionali (PTM) che contiene al momento del saggio possono essere misurate, ad esempio, mediante successiva spettrometria di massa o reazione con anticorpi specifici per PTM.