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A causa della necessità di ridurre i costi di lavoro, molti laboratori stanno sostituendo il tradizionale algoritmo di test della sifilide – lo screening con un test manuale nontreponemico, seguito da un test degli anticorpi anti-Treponema pallidum – con un algoritmo “inverso” che utilizza un test immunologico automatizzato per lo screening degli anticorpi anti-T. pallidum IgG. Una determinazione del titolo della reagina plasmatica rapida (RPR) viene quindi eseguita su campioni IgG-reattivi per (i) verificare la sifilide con un metodo alternativo e (ii) ottenere un titolo per la gestione del paziente. Inoltre, alcuni laboratori eseguono anche un test treponemico tradizionale (anticorpo treponemico fluorescente assorbito o test di agglutinazione delle particelle di T. pallidum) sui campioni che risultano positivi con un test di screening IgG. Un certo numero di studi ha dimostrato che i test immunologici IgG anti-T. pallidum hanno sensibilità e specificità paragonabili a quelle di altri test treponemici e non treponemici (1, 3, 4). Come per altri test di screening altamente sensibili, i test immunologici IgG anti-T. pallidum possono generare risultati falsi positivi, con un valore predittivo positivo inferiore nelle popolazioni a bassa prevalenza (2). Yen-Lieberman et al. hanno recentemente riferito che la forza del segnale (indice anticorpale) del test immunologico a flusso multiplo Bioplex 2200 IgG per la sifilide (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) potrebbe essere usata per identificare probabili risultati falsi positivi e quindi ridurre la necessità di test di conferma (5). Hanno dimostrato che i campioni con un’IA Bioplex ≥6,0 erano sempre positivi quando testati con un test immunoenzimatico (EIA) supplementare e quindi hanno proposto un algoritmo in cui solo i campioni con un’IA IgG Bioplex per la sifilide <6 sono sottoposti a EIA di conferma. Il loro studio è stato eseguito su campioni provenienti da una popolazione a bassa prevalenza, ma non ha descritto le caratteristiche specifiche della popolazione. Al fine di verificare ulteriormente l’efficacia dell’uso dei dati quantitativi Bioplex IgG per la sifilide, abbiamo valutato i risultati AI di tre diverse coorti di pazienti (individui incarcerati, donne che frequentano cliniche ostetriche e ginecologiche e donne al momento del parto) per la loro capacità di prevedere i risultati TP-PA. I dati sono stati stratificati in base al risultato del test RPR. Questo studio è stato approvato dalla University of Texas Medical Branch (UTMB) Institutional Review Board.

Abbiamo eseguito una revisione retrospettiva dei risultati dei test e dei dati dei pazienti dal sistema informativo del laboratorio UTMB per i campioni di siero sottoposti a test di routine per la sifilide durante dicembre 2010 e gennaio 2011. Un totale di 1.849, 3.512 e 873 campioni sono stati collegati a individui incarcerati, donne che frequentano le cliniche UTMB per cure prenatali o ginecologiche e donne al parto, rispettivamente. Tra gli individui incarcerati, oltre il 96% dei campioni erano di uomini. La distribuzione dei campioni per razza o etnia individuale era la seguente: Ispanico, 49,4%; afroamericano, 27%; bianco/non ispanico, 21,4%; e altro/non conosciuto, 2,2%. Tra i pazienti OB/Gyn, la distribuzione dei campioni per razza o etnia individuale era la seguente: Ispanico, 63,1%; bianco/non ispanico, 21,8%; afroamericano, 12,6%; e altro/sconosciuto, 2,5%. Tra le donne che hanno partorito all’ospedale UTMB, la distribuzione dei campioni per razza o etnia individuale era la seguente: Ispanico, 71,8%; bianco/non ispanico, 15,8%; afroamericano, 10%; e altro/sconosciuto, 2,4%.

I test Bioplex 2200 sifilide IgG, RPR (Sure-Vue; Biokit USA, Inc., Lexington, MA), e TP-PA (Fujirebio, Inc., Tokyo, Giappone) sono stati eseguiti secondo le istruzioni dei produttori. Il test Bioplex 2200 per la sifilide IgG è stato autorizzato dalla U.S. Food and Drug Administration per l’uso come test qualitativo. Inizialmente, i campioni con risultati equivoci (AI = da 0,9 a 1,0) o reattivi (AI ≥ 1,1) con Bioplex sono stati testati solo con RPR semiquantitativa. Nei casi in cui il test RPR non era reattivo, è stato eseguito un test TP-PA. A partire dalla metà di dicembre 2010, tutti i campioni che erano equivoci o reattivi con il Bioplex sono stati testati con entrambi i test semiquantitativi RPR e TP-PA. La sensibilità e la specificità del Bioplex, basate su un valore cutoff AI di 6 o 8, sono state calcolate utilizzando tabelle di contingenza 2 per 2. Il test TP-PA è stato considerato il metodo di riferimento. L’analisi delle caratteristiche operative del ricevitore (ROC) è stata eseguita utilizzando il calcolatore basato sul web disponibile all’indirizzo http://www.rad.jhmi.edu/jeng/javarad/roc/JROCFITi.html (accesso 5 luglio 2011).

I tassi di reattività alle IgG anti-T. pallidum determinati dal test Bioplex per le coorti incarcerati, OB/Gyn e parto erano rispettivamente 7,5%, 1,6% e 2,6% (dati non mostrati). La capacità del valore AI del test Bioplex IgG di prevedere un risultato TP-PA reattivo variava in base alla coorte di pazienti e al titolo RPR di accompagnamento (Tabella 1). Come riportato da Yen-Lieberman et al. (5), i campioni che presentavano titoli RPR reattivi avevano maggiori probabilità di presentare risultati TP-PA reattivi. Tuttavia, abbiamo valutato i campioni con un titolo RPR di 1:1 separatamente da quelli con titoli ≥2 a causa dell’evidenza clinica ed epidemiologica che indica che un titolo RPR di 1:1 non è sempre sufficiente a confermare un risultato IgG reattivo. Infatti, i nostri dati mostrano che i campioni IgG-reattivi con titoli RPR di ≥2 hanno maggiori probabilità di essere confermati dal test TP-PA. Tra le coorti OB/Gyn e parto, non ci sono stati risultati TP-PA-non reattivi quando il titolo RPR era ≥2. Tra le coorti incarcerate e OB/Gyn, un cutoff di AI di 8 ha fornito una maggiore specificità rispetto a un cutoff di 6. Yen-Lieberman et al. hanno dimostrato che un AI di 6 ha fornito il 100% di specificità per la loro popolazione di studio (5). Anche con un cutoff di 8, la specificità del test Bioplex IgG nel nostro studio non ha raggiunto il 100% nella coorte incarcerata per i campioni con risultati RPR-non reattivi o con un titolo di 1:1 (spesso considerato un titolo equivoco). Questa coorte è ad alto rischio di sifilide, con un tasso di reattività alle IgG del 7,5%. Tra i campioni di individui incarcerati, l’85,2% (98/115) dei campioni IgG-reattivi è stato confermato dal test TP-PA (dati non mostrati). In confronto, il tasso di reattività alle IgG nella coorte OB/Gyn è stato dell’1,6%; il 63,0% (29/46) dei risultati è stato confermato dal test TP-PA. Per valutare l’effetto dei valori cutoff di Bioplex IgG AI per la sifilide sulla sensibilità e specificità dei test, è stata eseguita un’analisi ROC. L’analisi ROC ha mostrato che la specificità del test IgG per la sifilide per l’identificazione dei campioni confermati con TP-PA di solito declinava rapidamente a valori AI inferiori a 8.

In conclusione, dimostriamo per la prima volta l’utilità dei dati quantitativi Bioplex IgG per la sifilide in diverse popolazioni di pazienti e l’utilità di un valore di cutoff per identificare i campioni che potrebbero non richiedere un ulteriore test treponemico di conferma. Un cutoff AI di 8 era necessario per ottenere la massima specificità nelle nostre coorti di incarcerati e OB/Gyn. Titoli RPR di ≥2 sono sufficienti a suggerire che un risultato IgG Bioplex reattivo in entrambe le coorti a basso e alto rischio rappresenta una determinazione accurata dell’esposizione al T. pallidum. Infine, i laboratori che scelgono di utilizzare il valore AI come parte del loro test IgG per la sifilide devono verificare indipendentemente le caratteristiche di prestazione di questa modifica alla procedura raccomandata dal produttore. Questo è importante anche perché, come abbiamo dimostrato, il cutoff AI ottimale può variare a seconda della popolazione di pazienti.

(Questi dati sono stati presentati in parte al meeting annuale dell’American Society for Microbiology a New Orleans, LA, nel maggio 2011.)