Angelman, Prader-Willi test diagnostico è veloce, accurato, meno costoso
Il Gennaio 5, 2022 da adminRicercatori hanno sviluppato un nuovo test diagnostico molecolare rapido e preciso per i pazienti con la sindrome di Angelman e Prader-Willi.
Il loro studio, “Un rapido e accurato test di analisi di fusione ad alta risoluzione sensibile alla metilazione per la diagnosi dei pazienti di Prader Willi e Angelman”, è stato pubblicato su Molecular Genetics & Genomic Medicine.
Le sindromi di Prader-Willi (PWS) e Angelman (AS) sono due rare malattie genetiche causate da difetti di imprinting nella stessa regione del cromosoma 15. Mentre la PWS è associata alla perdita di funzione dei geni paterni, Angelman è causata dalla perdita di funzione dei geni materni. L’imprinting genomico è il processo attraverso il quale una copia di un gene, la copia materna o paterna, viene messa a tacere da una modifica chimica del DNA chiamata metilazione.
“La diagnosi di laboratorio di PWS e AS è una sfida e richiede diversi metodi molecolari e citogenetici per chiarire il meccanismo genetico che porta allo sviluppo della sindrome”, hanno scritto i ricercatori.
L’analisi dei modelli di metilazione del DNA in una regione specifica del cromosoma 15 – conosciuta come il locus SNURF-SNRPN tramite la reazione a catena della polimerasi specifica per la metilazione (MS-PCR, una tecnica che rileva i cambiamenti nella metilazione del DNA in regioni specifiche di una sequenza di DNA) – permette ai ricercatori di diagnosticare e distinguere i pazienti con PWS da quelli con AS.
“Anche se il sequenziamento del DNA è considerato il ‘gold standard’ per lo screening delle mutazioni, questa metodologia rimane relativamente costosa, laboriosa e richiede tempo”, hanno scritto i ricercatori.
In questo studio, gli scienziati hanno sviluppato un metodo basato sulla fusione ad alta risoluzione (HRM, una tecnica che permette ai ricercatori di distinguere tra sequenze di DNA normali e mutate in base al loro profilo di fusione). Si tratta di un’alternativa semplice, veloce, sensibile, specifica e a basso costo al sequenziamento del DNA per diagnosticare e distinguere i pazienti PWS e AS.
Per testare e convalidare il nuovo metodo MS-HRM, i ricercatori hanno prima isolato il DNA da campioni di sangue di 43 pazienti sospettati di avere o PWS o AS. Hanno poi eseguito e confrontato i risultati della MS-PCR standard con il nuovo metodo MS-HRM.
I risultati del test hanno mostrato che MS-HRM e MS-PCR erano in accordo in tutti i casi, identificando 19 (44%) pazienti con PWS, tre (7%) con AS, e 21 (49%) senza alterazioni.
La successiva ibridazione in situ a fluorescenza (FISH, una tecnica che permette ai ricercatori di visualizzare regioni specifiche di cromosomi etichettati con una sonda fluorescente) eseguita su 19 (44%) pazienti ha rilevato quattro casi di PWS causati da una delezione (in cui si perde parte della sequenza di DNA di un gene) nel cromosoma 15.
La MS-HRM “non ha bisogno di tecniche aggiuntive come l’elettroforesi su gel di agarosio, riducendo il tempo necessario per ottenere un risultato accurato e riducendo i rischi di contaminazione incrociata tra i campioni”, hanno scritto i ricercatori.
“La sensibilità della MS-HRM permette la rilevazione di una piccola frazione di campione è importante nell’analisi dei campioni, che sono difficili da ottenere soprattutto dai neonati ipotonici. Inoltre, alta riproducibilità di HRM rende questo metodo adatto sia per la ricerca e applicazioni diagnostiche nello studio di PWS e AS sindromi,” hanno aggiunto.
“Una diagnosi rapida e accurata di PWS o AS permette un intervento medico efficace, evitando diverse caratteristiche di questi disturbi, fornendo una migliore qualità di vita,” hanno concluso.
- Dettagli dell’autore
Lascia un commento