Luciferáz tesztek

Egy riportergén segítségével könnyebb megérteni, hogy egy promóter vagy válaszelem hogyan szabályozza a génexpressziót. A luciferáz enzimek ideálisak az egyszerű fényalapú detektálással és nagy érzékenységgel rendelkező riportervizsgálatokhoz, amelyekkel még a legkisebb expressziós változások is számszerűsíthetők. Bár a riporterpróbákat gyakran használják a promóteraktivitás változásainak értékelésére, a jelátvitel, a fehérjefunkció, a miRNS-szabályozás, sőt az élő szervezetekben zajló folyamatok valós idejű mérésére is használhatók.

A riporterpróbák alapja a vektor, amely a riportergént hordozza, és a detektáló reagensek, amelyek szubsztrátot biztosítanak a luciferáz enzim aktivitásának fényjellé történő átalakításához. A kettős luciferáz detektáló reagensek elnyomják az első riporterjelet a második jel leolvasása előtt, hogy lehetővé tegyék a két riporter egymás utáni mérését ugyanabból a mintából. A második riportert gyakran belső kontrollként használják a pontosabb adatok érdekében.

A riportervektor kiválasztása és az esetleges elemek klónozása (ha szükséges) után a vektort tenyésztett sejtekbe juttatják, általában transzfekción alapuló módszerekkel, expresszálják és az aktivitást lítiumos (végpontos) reagensekkel vagy élősejtes reagensekkel detektálják az ugyanazon sejtekben idővel bekövetkező változások mérésére. A luciferáz riporterpróbák más próbákkal is multiplexelhetők az apoptózis, az anyagcsere és egyéb tényezők felmérésére. A luciferáz tesztek mérése jellemzően lemez alapú luminométerrel történik.