Honnan tudom, hogy az antitest keresztreagál-e?

A keresztreaktivitás akkor fordul elő, amikor egy specifikus antigén ellen termelt antitest felismer két olyan antigént, amelyek hasonló szerkezeti régiókkal rendelkeznek.

Mi a keresztreaktivitás?

Az antitestnek van egy specifikus aminosav szekvenciája (a Fab régió), amely meghatározza az affinitását egy specifikus antigénhez. Az antigének közötti keresztreaktivitás akkor fordul elő, amikor az egyik specifikus antigén ellen termelt antitest egy másik antigénnel szemben versengő magas affinitással rendelkezik. Ez gyakran akkor fordul elő, ha két antigén hasonló szerkezeti régiókkal rendelkezik, amelyeket az antitest felismer.

A keresztreaktivitás érvénytelenítheti a kísérlet eredményeit, és ezáltal befolyásolhatja a tudományos reprodukálhatóságot. Ezért egy antitest keresztreaktivitásának vizsgálata közeli rokon fehérjékkel kritikus validációs kísérlet.

Hogyan ellenőrizhetem a keresztreaktivitást?

A keresztreaktivitás nem mindig negatív tulajdonság. Néha javíthatja egy antitest hasznosságát. Például egy ellenanyag fajokon átívelő keresztreaktivitása egy célpontra lehetővé teszi ugyanazon ellenanyag használatát több modellorganizmusban.

A fajokon átívelő keresztreaktivitás gyakran előfordul a humán antigénből származó ellenanyagok esetében. A Proteintech katalógusában szereplő számos humán antitest jelentős keresztreaktivitást mutat a nem humán modellekben, például egérben, patkányban, majomban vagy zebrahalban található homológ fehérjékkel.

A fehérje szekvencia homológiája és a nem emberi szervezetekben antitestjeinket használó publikációk alapján a Proteintech számos antitestje nem csak emberi mintákhoz, hanem számos szervezethez is használható. A homológia az NCBI-BLAST weboldalon keresztül az immunogén és a célantigén páronkénti szekvencia-összehasonlításával vizsgálható, további információk pedig az UniProt egyetemes fehérjeforrás weboldalon ellenőrizhetők.

Melyik a “helyes homológia szám” a keresztreaktivitás előrejelzéséhez?

A tapasztalataink alapján, ha az immunogén és a potenciálisan keresztreaktív fehérje szekvenciája 75%-os szekvencia-homológiát mutat, akkor a keresztreakciót előre jelezzük. Ha a minta nem humán, poliklonális minta ajánlott, mivel a felismert epitópok keveréke van.

Az antitestem keresztreagál más fajokkal?

Az immunogén és a potenciálisan keresztreaktív fehérje szekvenciája közötti fehérjeszekvencia-hasonlóság mértékétől függ.

Hogyan kerüljük el a keresztreaktivitást western blotban

Ha lehetséges, ajánlott az elsőként használt ellenanyagra specifikus másodlagos ellenanyagot használni; például ha az elsődleges ellenanyag egér, akkor a másodlagos ellenanyagnak anti egér IgG-HRP-nek kell lennie. Abban az esetben, ha a másodlagos antitest poliklonális és a teljes IgG molekula ellen generált, akkor az elsődleges egér Ab-t felismerő nyúl antitest nem feltétlenül a legjobb választás a közös Kappa könnyűlánc régió felismerése miatt.

Hogyan kerüljük el a keresztreaktivitást az immunfestési kísérletek során

A szövetből származó mintákkal végzett immunfestési vizsgálatok során előfordulhat keresztreaktivitás, ezért gyakori, hogy nem teljes IgG-ket, hanem fragmentumokat használunk elsődleges immunglobulinokként (például egér antitestekkel egérszöveteken végzett munka során). Továbbá, a többszörös festés során a keresztreakció elkerülése érdekében próbáljon meg különböző másodlagos antitesteket használni, például 568-as nyúl anti-kecske 488-as nyúl anti-egér antitesttel, amelyek meglehetősen gyakoriak és könnyen beszerezhetők.

Mi a másodlagos antitest keresztadszorpció és keresztreaktivitás?

A keresztadszorbeált másodlagos antitestek azok a poliklonális antitestek, amelyeket egy további tisztítási lépéssel állítanak elő, hogy kiszűrjék az immunglobulin (IgG) célponton kívüli fajaihoz kötődő tagokat. Ez az eljárás csökkentheti a fajok keresztreaktivitását és növelheti a specificitást. A kísérlet beállításától függően léteznek keresztadszorbeált és erősen keresztadszorbeált másodlagos antitest fajták.

1. Poliklonális vs. monoklonális antitestek

2. Szekunder antitest kiválasztása

3. Fehérje vagy peptid antigén? Előnyök és hátrányok