Essais de luciférase

Comprendre comment un promoteur ou un élément de réponse peut contrôler l’expression d’un gène est plus facile lorsqu’il est étudié avec un gène rapporteur. Les enzymes luciférases sont idéalement adaptées aux tests rapporteurs avec une détection simple basée sur la lumière et une haute sensibilité qui peut quantifier même de petits changements dans l’expression. Si les tests rapporteurs sont souvent utilisés pour évaluer les changements dans l’activité des promoteurs, ils peuvent également être utilisés pour étudier la transduction des signaux, la fonction des protéines, la régulation des miARN et même la mesure en temps réel des processus dans les organismes vivants.

La base d’un test rapporteur est le vecteur, qui porte le gène rapporteur, et les réactifs de détection qui fournissent un substrat pour convertir l’activité de l’enzyme luciférase en un signal lumineux. Les réactifs de détection à double luciférase éteignent le signal du premier rapporteur avant de lire le second, ce qui permet de mesurer deux rapporteurs de manière séquentielle à partir du même échantillon. Le second rapporteur est souvent inclus comme contrôle interne pour des données plus précises.

Une fois que le vecteur rapporteur est sélectionné et que tous les éléments sont clonés (si nécessaire), le vecteur est introduit dans des cellules en culture, généralement en utilisant des méthodes basées sur la transfection, exprimé et l’activité détectée avec des réactifs lytiques (point final) ou des réactifs de cellules vivantes pour mesurer les changements dans les mêmes cellules au fil du temps. Les tests rapporteurs de luciférase peuvent être multiplexés avec d’autres tests pour évaluer l’apoptose, le métabolisme, etc. La mesure des tests à la luciférase est généralement effectuée à l’aide d’un luminomètre à plaque.