Comment savoir si l’anticorps aura une réaction croisée ?

La réactivité croisée se produit lorsqu’un anticorps élevé contre un antigène spécifique reconnaît deux antigènes qui ont des régions structurelles similaires.

Qu’est-ce que la réactivité croisée ?

Un anticorps a une séquence d’acides aminés spécifique (la région Fab) qui dicte son affinité pour un antigène spécifique. La réactivité croisée entre les antigènes se produit lorsqu’un anticorps élevé contre un antigène spécifique a une affinité élevée concurrente envers un antigène différent. C’est souvent le cas lorsque deux antigènes ont des régions structurelles similaires que l’anticorps reconnaît.

La réactivité croisée peut invalider les résultats d’une expérience et ainsi impacter la reproductibilité scientifique. Ainsi, tester la réactivité croisée d’un anticorps avec des protéines étroitement apparentées est une expérience de validation critique.

Comment vérifier la réactivité croisée ?

La réactivité croisée n’est pas toujours une qualité négative. Elle peut parfois améliorer l’utilité d’un anticorps. Par exemple, la réactivité croisée d’un anticorps pour une cible à travers les espèces permet au même anticorps d’être utilisé dans plusieurs organismes modèles.

La réactivité croisée à travers les espèces se produit souvent pour les anticorps dérivés d’antigènes humains. De nombreux anticorps humains du catalogue Proteintech présentent une réactivité croisée significative avec les protéines homologues dans les modèles non humains, tels que la souris, le rat, le singe ou le poisson zèbre.

Sur la base de l’homologie d’une séquence protéique et des publications utilisant nos anticorps dans des organismes non humains, de nombreux anticorps de Proteintech peuvent être utilisés non seulement pour des échantillons humains, mais aussi pour une variété d’organismes. L’homologie peut être évaluée en utilisant un alignement de séquence par paire de l’immunogène et de l’antigène cible par le biais du site web NCBI-BLAST, et des informations supplémentaires peuvent être vérifiées sur le site web de la ressource universelle des protéines UniProt.

Quel est le « bon chiffre » d’homologie pour prédire la réactivité croisée ?

Selon notre expérience, si l’immunogène et la séquence de la protéine à réaction croisée potentielle partagent une homologie de séquence de 75%, on prédit une réaction croisée. Si votre échantillon est non humain, un polyclonal est recommandé car il y a un mélange d’épitopes reconnus.

Mon anticorps réagit-il de manière croisée avec d’autres espèces ?

Cela dépend de l’étendue de la similarité de la séquence protéique entre l’immunogène et la séquence de la protéine à réaction croisée potentielle.

Comment éviter la réactivité croisée en western blot

Si possible, il est recommandé d’utiliser l’anticorps secondaire spécifique au premier anticorps utilisé ; par exemple, si l’anticorps primaire est de la souris, alors l’anticorps secondaire doit être une IgG-HRP anti-souris. Dans le cas où l’anticorps secondaire est polyclonal et généré contre la molécule entière d’IgG, alors l’anticorps de lapin reconnaissant l’Ab primaire de souris pourrait ne pas être le meilleur choix en raison de la reconnaissance de la région commune de la chaîne légère Kappa.

Comment éviter la réactivité croisée pendant les expériences d’immunomarquage

La réactivité croisée pourrait se produire dans les essais d’immunomarquage utilisant des échantillons dérivés de tissus ; par conséquent, il est courant d’utiliser des fragments, plutôt que des IgG entières, comme immunoglobulines primaires (par exemple, en travaillant avec des anticorps de souris sur des tissus de souris). En outre, tout en faisant une coloration multiple, pour s’assurer qu’il n’y a pas de réaction croisée, essayez d’utiliser différents anticorps secondaires, par exemple, 568 lapin anti-chèvre avec un 488 lapin anti-souris, qui sont assez communs et faciles à trouver.

Qu’est-ce que l’adsorption croisée des anticorps secondaires et la réactivité croisée ?

Les anticorps secondaires à adsorption croisée sont les anticorps polyclonaux qui sont fabriqués avec une étape de purification supplémentaire afin de filtrer les membres qui se lient à des espèces d’immunoglobulines (IgG) hors cible. Ce processus permet de réduire la réactivité croisée des espèces et d’augmenter la spécificité. Selon la configuration de l’expérience, il existe des variétés d’anticorps secondaires à adsorption croisée et à forte adsorption croisée.

1. Anticorps polyclonaux vs. monoclonaux

2. Sélection des anticorps secondaires

3. Antigène protéique ou peptidique ? Avantages et inconvénients