Luciferaasimääritykset

Promoottorin tai vaste-elementin geeniekspression hallinnan ymmärtäminen on helpompaa, kun sitä tutkitaan reportterigeenin avulla. Luciferaasientsyymit soveltuvat erinomaisesti reportteritesteihin, joissa on yksinkertainen valoon perustuva havaitseminen ja suuri herkkyys, jolla voidaan kvantifioida pienetkin muutokset ekspressiossa. Vaikka reportteritestejä käytetään usein promoottorin aktiivisuuden muutosten arviointiin, niitä voidaan käyttää myös signaalinsiirron, proteiinien toiminnan, miRNA:n säätelyn ja jopa elävissä organismeissa tapahtuvien prosessien reaaliaikaisen mittaamisen tutkimiseen.

Reporteritestin perustana on vektori, joka kantaa reportterigeeniä, ja detektioreagenssit, jotka tarjoavat substraatin, jolla luciferaasientsyymin aktiivisuus muunnetaan valosignaaliksi. Kaksoisluciferaasi-detektorireagenssit sammuttavat ensimmäisen reportterisignaalin ennen toisen lukemista, jotta kaksi reportteria voidaan mitata peräkkäin samasta näytteestä. Toinen reportteri on usein mukana sisäisenä kontrollina tarkempien tietojen saamiseksi.

Kun reportterivektori on valittu ja kaikki elementit kloonattu (tarvittaessa), vektori viedään viljeltyihin soluihin tyypillisesti transfektioon perustuvilla menetelmillä, ekspressoidaan ja aktiivisuus havaitaan lytisillä reagensseilla tai elävässä solussa käytettävillä reagensseilla, joiden avulla voidaan mitata muutoksia samoissa soluissa ajan kuluessa. Luciferaasireportterimääritykset voidaan multipleksoida muiden määritysten kanssa apoptoosin, aineenvaihdunnan ja muiden tekijöiden arvioimiseksi. Luciferaasitestejä mitataan tyypillisesti levypohjaisella luminometrillä.