Entsyymiaktiivisuusmääritys

Valtaosan biologisten prosessien katalysoinnista suorittavat entsyymit, joilla on monenlaisia toimintoja elävissä organismeissa. Ne ovat välttämättömiä aineenvaihduntaprosesseissa, solujen signaloinnissa ja säätelyssä, ja ne voivat synnyttää molekyylien liikettä ja aktiivista kuljetusta. Entsymaattiset reaktiot muuttavat substraattimolekyylejä kemiallisesti muunnetuiksi tuotteiksi. Näihin modifikaatioihin kuuluvat proteolyyttinen tai glykolyyttinen hajoaminen, kemialliset modifikaatiot, kuten fosforylaatio, asylaatio, glykosylaatio tai oksidatiiviset ja reduktiiviset prosessit. Säätymätön entsyymiaktiivisuus voi johtaa sairaustiloihin. Tämän vuoksi entsyymejä pidetään houkuttelevina lääkehoidon farmakologisten interventioiden kohteina.

Kymmenien vuosien kokemuksemme aktiivisten entsyymien ja niiden substraattien suunnittelusta ja valmistuksesta tukee yhä laajenevan biokemiallisten määritysten valikoiman kehittämistä. Tarjoamme entsymaattisiin määrityksiin liittyviä palveluja auttaaksemme entsyymien ja proteiinien tutkimukseen keskittyviä tutkijoita:

• entsyymiaktiivisuuden ja -inhibition kineettinen arviointi.
• Inhibiittorien seulonta ja validointi.
• Lääkeyhdisteiden IC50-arvon määrittäminen.
• Ensyymi-inhibiittoritutkimukset, joissa analysoidaan vaikutustapa
• Tutkimukset entsyymi-inhibition palautuvuudesta
• Substraattiprofiilien profilointi, jossa analysoidaan entsyymien selektiivisyyttä

Ensyymiaktiivisuusmäärityksissämme on kyse siitä, että kiinnostuksen kohteena oleva valkuaisaine otetaan immunokapseloimalla ja sen jälkeen mitataan substraatin tai tuotteen liikevaihto. Niissä käytetään ainoastaan monoklonaalisia vasta-aineita, jotka on seulottu entsyymin eristämiseksi aktiivisessa muodossa ja komplekseissa, jotka todennäköisesti edustavat niiden assosiaatioita in situ. Tästä on monia etuja. Entsyymi erotetaan muista proteiineista, jotka käyttävät tai tuottavat samoja seulottuja substraatteja tai tuotteita, ja tämä mahdollistaa yksinkertaiset määritykset, kuten ATP:n, NADH:n, pyruvaatin jne. hyödyntämisen, joihin kohdistuu useita reaktioita in vivo. Useimmille entsyymeille, joille meillä on aktiivisuusmäärityssarjoja, tarjoamme myös sandwich-ELISA-määrityksiä. Yhdistämällä nämä kaksi on mahdollista tuottaa spesifisiä aktiivisuustietoja. Lisäksi, koska entsyymi on erotettu muista solun komponenteista, sen määritysajankohtana sisältämät posttranslationaaliset modifikaatiot (PTM) voidaan mitata esim. myöhemmällä massaspektrometrialla tai reagoimalla PTM-spesifisiin vasta-aineisiin.