Angelmanin ja Prader-Willin diagnostinen testi on nopea, tarkka ja edullisempi
On 5 tammikuun, 2022 by adminTutkijat ovat kehittäneet uuden nopean ja tarkan molekyylidiagnostisen testin potilaille, joilla on joko Angelmanin tai Prader-Willin oireyhtymä. PWS liittyy isän geenien toiminnan menetykseen, kun taas Angelman johtuu äidin geenien toiminnan menetyksestä. Genominen imprinting on prosessi, jossa geenin toinen kopio, joko äidin tai isän kopio, hiljennetään kemiallisella DNA-muutoksella, jota kutsutaan metylaatioksi.
”PWS:n ja AS:n laboratoriodiagnostiikka on haasteellinen, ja se vaatii useita molekyyli- ja sytogeneettisiä menetelmiä, jotta voidaan selvittää geneettinen mekanismi, joka johtaa oireyhtymän kehittymiseen”, tutkijat kirjoittivat.
DNA:n metylaatiomallien analysointi kromosomin 15 tietyllä alueella – joka tunnetaan nimellä SNURF-SNRPN-lokus – metylaatiospesifisellä polymeraasiketjureaktiolla (MS-PCR, tekniikka, joka havaitsee DNA:n metylaatiomuutokset DNA-sekvenssin tietyillä alueilla) – mahdollistaa sen, että tutkijat voivat diagnosoida PWS:ää sairastavat potilaat ja erottaa heidät AS:ää sairastavista.
”Vaikka DNA-sekvensointia pidetään ’kultaisena standardina’ mutaatioiden seulonnassa, tämä menetelmä on edelleen suhteellisen kallis, työläs ja aikaa vievä”, tutkijat kirjoittavat.”
Tässä tutkimuksessa tutkijat kehittivät menetelmän, joka perustuu korkearesoluutioiseen sulatukseen (HRM, tekniikka, jonka avulla tutkijat pystyvät erottamaan normaalit ja mutatoituneet DNA-sekvenssit toisistaan sulamisprofiilinsa perusteella). Se on yksinkertainen, nopea, herkkä, spesifinen ja edullinen vaihtoehto DNA-sekvensoinnille PWS- ja AS-potilaiden diagnosoimiseksi ja erottamiseksi toisistaan.
Testatakseen ja validoidakseen uuden MS-HRM-menetelmän tutkijat eristivät ensin DNA:ta 43 potilaan verinäytteistä, joiden epäiltiin sairastavan joko PWS:ää tai AS:ää. Sen jälkeen he suorittivat ja vertasivat vakiomuotoisen MS-PCR:n tuloksia uuteen MS-HRM-menetelmään.
Testitulokset osoittivat, että MS-HRM ja MS-PCR vastasivat toisiaan kaikissa tapauksissa ja tunnistivat 19 (44 %) potilasta, joilla oli PWS, kolme (7 %) potilasta, joilla oli AS, ja 21 (49 %) potilasta, joilla ei ollut muutosta.
Seuraava fluoresenssi in situ -hybridisaatio (FISH, tekniikka, jonka avulla tutkijat voivat visualisoida fluoresoivalla koettimella leimattuja kromosomien tiettyjä alueita), joka suoritettiin 19 (44 %) potilaalle, havaitsi neljä PWS-tapausta, jotka johtuivat kromosomissa 15 olevasta deleetiosta (jossa osa geenin DNA-sekvenssistä katoaa).
MS-HRM ”ei tarvitse lisätekniikoita, kuten agaroosigeelielektroforeesia , mikä lyhentää tarkan tuloksen saamiseen kuluvaa aikaa ja vähentää ristikontaminaation riskiä näytteiden välillä”, tutkijat kirjoittivat.
”MS-HRM:n herkkyys mahdollistaa pienen murto-osan näytteen havaitsemisen, mikä on tärkeää sellaisten näytteiden analysoinnissa, joita on hankala saada erityisesti vastasyntyneiltä hypotonisilta imeväisikäisiltä . Lisäksi HRM:n korkea toistettavuus tekee tästä menetelmästä sopivan sekä tutkimus- että diagnostisiin sovelluksiin PWS- ja AS-oireyhtymien tutkimuksessa”, he lisäsivät.
”PWS- tai AS-oireyhtymien nopea ja tarkka diagnoosi mahdollistaa tehokkaan lääkkeellisen intervention, jolla vältetään useita näiden häiriöiden ominaispiirteitä ja tarjotaan parempi elämänlaatu”, he päättelivät.
- Tekijän tiedot
.
Vastaa