¿Qué es la espectroscopia de fluorescencia?

¿Qué es un espectro de fluorescencia?

Fig. 1: Un espectro de excitación de fluorescencia (azul) y un espectro de emisión (púrpura) son imágenes especulares entre sí

Los espectros de fluorescencia en estado estacionario se producen cuando las moléculas, excitadas por una fuente de luz constante, emiten fluorescencia, y los fotones emitidos, o la intensidad, se detectan en función de la longitud de onda. Un espectro de emisión de fluorescencia es cuando se fija la longitud de onda de excitación y se explora la longitud de onda de emisión para obtener un gráfico de intensidad frente a la longitud de onda de emisión.

Un espectro de excitación de fluorescencia es cuando se fija la longitud de onda de emisión y se explora la longitud de onda del monocromador de excitación. De este modo, el espectro da información sobre las longitudes de onda a las que una muestra absorberá para emitir a la única longitud de onda de emisión elegida para la observación. Es análogo al espectro de absorbancia, pero es una técnica mucho más sensible en términos de límites de detección y especificidad molecular. Los espectros de excitación son específicos para una única longitud de onda/especie emisora, a diferencia del espectro de absorbancia, que mide todas las especies absorbentes en una solución o muestra. Los espectros de emisión y excitación de un determinado fluoróforo son imágenes especulares entre sí. Normalmente, el espectro de emisión se produce a longitudes de onda más altas (menor energía) que el espectro de excitación o absorbencia.

Estos dos tipos de espectros (emisión y excitación) se utilizan para ver cómo está cambiando una muestra. La intensidad espectral y o la longitud de onda del pico pueden cambiar con variantes como la temperatura, la concentración o las interacciones con otras moléculas de su entorno. Esto incluye moléculas quencher y moléculas o materiales que implican transferencia de energía. Algunos fluoróforos también son sensibles a las propiedades del entorno del disolvente, como el pH, la polaridad y ciertas concentraciones de iones.