La prueba de diagnóstico de Angelman y Prader-Willi es rápida, precisa y menos costosa
On enero 5, 2022 by adminLos investigadores han desarrollado una nueva prueba de diagnóstico molecular rápida y precisa para los pacientes con el síndrome de Angelman y Prader-Willi.
Su estudio, «A rapid and accurate methylation-sensitive high-resolution melting analysis assay for the diagnosis of Prader Willi and Angelman patients,» fue publicado en Molecular Genetics & Genomic Medicine.
Los síndromes de Prader-Willi (SPW) y Angelman (AS) son dos trastornos genéticos raros causados por defectos de impronta en la misma región del cromosoma 15. Mientras que el SPW está asociado a la pérdida de función de los genes paternos, Angelman está causado por la pérdida de función de los genes maternos. La impronta genómica es el proceso por el que una copia de un gen, ya sea la materna o la paterna, se silencia mediante una modificación química del ADN denominada metilación.
«El diagnóstico de laboratorio del SPW y el SA es un reto y exige varios métodos moleculares y citogenéticos para dilucidar el mecanismo genético que conduce al desarrollo del síndrome», escribieron los investigadores.
El análisis de los patrones de metilación del ADN en una región específica del cromosoma 15 -conocida como locus SNURF-SNRPN mediante la reacción en cadena de la polimerasa específica de la metilación (MS-PCR, una técnica que detecta cambios en la metilación del ADN en regiones específicas de una secuencia de ADN)- permite a los investigadores diagnosticar y distinguir a los pacientes con SPW de los que padecen AS.
«Aunque la secuenciación del ADN se considera el ‘patrón de oro’ para el cribado de mutaciones, esta metodología sigue siendo relativamente costosa, laboriosa y lenta», escribieron los investigadores.
En este estudio, los científicos desarrollaron un método basado en la fusión de alta resolución (HRM, una técnica que permite a los investigadores distinguir entre secuencias de ADN normales y mutadas en función de su perfil de fusión). Se trata de una alternativa sencilla, rápida, sensible, específica y de bajo coste a la secuenciación del ADN para diagnosticar y distinguir a los pacientes con SPW y EA.
Para probar y validar el nuevo método de MS-HRM, los investigadores aislaron primero el ADN de muestras de sangre de 43 pacientes sospechosos de padecer SPW o EA. A continuación, realizaron y compararon los resultados de la MS-PCR estándar con el nuevo método MS-HRM.
Los resultados de las pruebas mostraron que la MS-HRM y la MS-PCR coincidían en todos los casos, identificando a 19 (44%) pacientes con SPW, tres (7%) con AS y 21 (49%) sin alteraciones.
La hibridación fluorescente in situ (FISH, una técnica que permite a los investigadores visualizar regiones específicas de los cromosomas marcadas con una sonda fluorescente) realizada en 19 (44%) pacientes detectó cuatro casos de SPW causados por una deleción (donde se pierde parte de la secuencia de ADN de un gen) en el cromosoma 15.
La MS-HRM «no necesita técnicas adicionales, como la electroforesis en gel de agarosa, lo que reduce el tiempo necesario para obtener un resultado preciso y disminuye los riesgos de contaminación cruzada entre las muestras», escribieron los investigadores.
«La sensibilidad de la MS-HRM permite la detección de una fracción ínfima de la muestra, lo que es importante en el análisis de las muestras, que son difíciles de obtener, especialmente de los recién nacidos hipotónicos. Además, la alta reproducibilidad de la HRM hace que este método sea adecuado tanto para la investigación como para las aplicaciones de diagnóstico en el estudio de los síndromes del SPW y del SA», añadieron.
«Un diagnóstico rápido y preciso del SPW o del SA permite una intervención farmacológica eficaz, evitando varias características de estos trastornos, proporcionando una mejor calidad de vida», concluyeron.
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