Ensayo de actividad enzimática

La gran mayoría de los procesos biológicos catalizadores son realizados por enzimas que proporcionan una amplia variedad de funciones dentro de los organismos vivos. Son indispensables para los procesos metabólicos, la señalización y la regulación celular y pueden generar movimiento y transporte activo de moléculas. Las reacciones enzimáticas convierten específicamente las moléculas de sustrato en productos químicamente modificados. Estas modificaciones incluyen la degradación proteolítica o glicolítica, las modificaciones químicas como la fosforilación, la acilación, la glicosilación o los procesos oxidativos y reductores. Una actividad enzimática desregulada puede provocar estados de enfermedad. Como resultado, las enzimas se consideran objetivos atractivos para la intervención farmacológica en la terapia de medicamentos.

Nuestra experiencia de décadas en el diseño y fabricación de enzimas activas y sus sustratos apoya el desarrollo de una cartera de ensayos bioquímicos en constante expansión. Proporcionamos servicios de ensayos enzimáticos para ayudar a los científicos centrados en la investigación de enzimas y proteínas:

• Evaluación cinética de la actividad e inhibición de enzimas.
• Cribado y validación de inhibidores.
• Determinación del IC50 de compuestos farmacológicos.
• Estudios de inhibidores enzimáticos que analizan el modo de acción
• Investigaciones sobre la reversibilidad de la inhibición enzimática
• Perfiles de sustrato que analizan la selectividad de las enzimas

Nuestros ensayos de actividad enzimática implican primero la inmunocaptura de la proteína de interés seguida de la medición del recambio de sustrato o producto. En ellos se emplean únicamente anticuerpos monoclonales que han sido seleccionados para aislar la enzima en forma activa y en complejos que probablemente representen sus asociaciones in situ. Las ventajas son muchas. La enzima se separa de otras proteínas que utilizan o producen los mismos sustratos o productos cribados y esto permite realizar ensayos sencillos como la utilización de ATP, NADH, piruvato, etc., que son objeto de múltiples reacciones in vivo. Para la mayoría de las enzimas para las que tenemos kits de ensayo de actividad, también proporcionamos ensayos ELISA sándwich de cantidad. Combinando ambos, es posible generar datos de actividad específicos. Además, como la enzima está separada de otros componentes celulares, las modificaciones postraduccionales (PTM) que contiene en el momento del ensayo pueden medirse, por ejemplo, por espectrometría de masas posterior o por reacción a anticuerpos específicos de PTM.