Cómo puedo saber si el anticuerpo tendrá una reacción cruzada?

La reactividad cruzada se produce cuando un anticuerpo criado contra un antígeno específico reconoce dos antígenos que tienen regiones estructurales similares.

¿Qué es la reactividad cruzada?

Un anticuerpo tiene una secuencia específica de aminoácidos (la región Fab) que dicta su afinidad por un antígeno específico. La reactividad cruzada entre antígenos se produce cuando un anticuerpo criado contra un antígeno específico tiene una alta afinidad competitiva hacia un antígeno diferente. Esto suele ocurrir cuando dos antígenos tienen regiones estructurales similares que el anticuerpo reconoce.

La reactividad cruzada puede invalidar los resultados de un experimento y, por tanto, afectar a la reproducibilidad científica. Por lo tanto, la comprobación de la reactividad cruzada de un anticuerpo con proteínas estrechamente relacionadas es un experimento de validación crítico.

¿Cómo puedo comprobar la reactividad cruzada?

La reactividad cruzada no es siempre una cualidad negativa. A veces puede mejorar la utilidad de un anticuerpo. Por ejemplo, la reactividad cruzada de un anticuerpo para una diana a través de las especies permite que el mismo anticuerpo se utilice en múltiples organismos modelo.

La reactividad cruzada a través de las especies ocurre a menudo para los anticuerpos derivados de antígenos humanos. Muchos anticuerpos humanos del catálogo de Proteintech tienen una reactividad cruzada significativa con las proteínas homólogas en modelos no humanos, como el ratón, la rata, el mono o el pez cebra.

Basado en la homología de una secuencia proteica y en las publicaciones que utilizan nuestros anticuerpos en organismos no humanos, muchos de los anticuerpos de Proteintech pueden utilizarse no sólo para muestras humanas, sino también para una variedad de organismos. La homología puede evaluarse utilizando una alineación de secuencias por pares del inmunógeno y el antígeno objetivo a través del sitio web NCBI-BLAST, y puede comprobarse más información en el sitio web de recursos de proteínas universales UniProt.

¿Cuál es el «número correcto» de homología para predecir la reactividad cruzada?

En base a nuestra experiencia, si el inmunógeno y la secuencia de la proteína potencialmente reactiva comparten un 75% de homología de secuencia, se predice que habrá reacción cruzada. Si su muestra no es humana, se recomienda un policlonal porque hay una mezcla de epítopos reconocidos.

¿Mi anticuerpo tiene reacción cruzada con otras especies?

Depende del grado de similitud de la secuencia de la proteína entre el inmunógeno y la secuencia de la proteína potencialmente reactiva cruzada.

Cómo evitar la reactividad cruzada en western blot

Si es posible, se recomienda utilizar el anticuerpo secundario específico del primer anticuerpo utilizado; por ejemplo, si el anticuerpo primario es de ratón, entonces el anticuerpo secundario debería ser IgG-HRP anti-ratón. En caso de que el anticuerpo secundario sea policlonal y se genere contra toda la molécula de IgG, entonces el anticuerpo de conejo que reconoce el Ab primario de ratón podría no ser la mejor opción debido al reconocimiento de la región común de la cadena ligera Kappa.

Cómo evitar la reactividad cruzada durante los experimentos de inmunotinción

La reactividad cruzada puede producirse en los ensayos de inmunotinción que utilizan muestras derivadas de tejidos; por lo tanto, es habitual utilizar fragmentos, en lugar de IgG enteras, como inmunoglobulinas primarias (por ejemplo, cuando se trabaja con anticuerpos de ratón en tejidos de ratón). Adicionalmente, al hacer una tinción múltiple, para asegurar que no haya reacción cruzada, trate de usar diferentes anticuerpos secundarios, por ejemplo, 568 conejo anti-cabra con un 488 conejo anti-ratón, que son bastante comunes y fáciles de encontrar.

¿Qué es la adsorción cruzada de anticuerpos secundarios y la reactividad cruzada?

Los anticuerpos secundarios de adsorción cruzada son aquellos anticuerpos policlonales que se fabrican con un paso de purificación adicional con el fin de filtrar los miembros que se unen a las especies de inmunoglobulina (IgG) fuera del objetivo. Este proceso puede disminuir la reactividad cruzada entre especies y aumentar la especificidad. Dependiendo de la configuración del experimento, existen variedades de anticuerpos secundarios de adsorción cruzada y de alta adsorción cruzada.

1. Anticuerpos policlonales frente a monoclonales

2. Selección de anticuerpos secundarios

3. ¿Antígeno proteico o peptídico? Ventajas e inconvenientes