Genetik der Myasthenia gravis: Eine Fall-Kontroll-Assoziationsstudie in der hellenischen Bevölkerung

Abstract

Myasthenia gravis (MG) ist eine heterogene Autoimmunerkrankung, die durch die Produktion von Autoantikörpern gegen Proteine der postsynaptischen Membran in der neuromuskulären Verbindung gekennzeichnet ist. Der Beitrag genetischer Faktoren zur Anfälligkeit für MG wurde in Familien- und Zwillingsstudien untersucht, der genaue genetische Hintergrund der Krankheit ist jedoch nach wie vor nicht klar. Wir haben eine Fall-Kontroll-Assoziationsstudie an 101 nicht verwandten MG-Patienten hellenischer Herkunft und 101 gesunden Freiwilligen durchgeführt, um die Beteiligung allgemeiner genetischer Varianten an der Anfälligkeit für MG zu bewerten. Wir konzentrierten uns auf drei Kandidatengene, die eindeutig mit verschiedenen Autoimmunkrankheiten in Verbindung gebracht wurden, um ihre mögliche Beteiligung an der Pathogenese der MG zu untersuchen. Dabei handelt es sich um den Interferon-Regulationsfaktor 5 (IRF-5), das TNFα-induzierte Protein 3 (TNFAIP3), auch bekannt als A20, und Interleukin-10 (IL-10), Schlüsselmoleküle bei der Regulierung der Immunfunktion. Es wurde eine statistische Tendenz der Assoziation () zwischen IL-10-Promotor-Einzel-Nukleotid-Polymorphismen (SNPs) und den Untergruppen von MG-Patienten mit frühem und spätem Auftreten festgestellt. Bei den übrigen untersuchten Varianten wurden keine statistisch signifikanten Unterschiede festgestellt. Soweit uns bekannt ist, ist dies der erste weltweite Versuch, den möglichen Zusammenhang zwischen gemeinsamen genetischen Varianten von IRF-5 und TNFAIP3 und der genetischen Grundlage von MG zu untersuchen.

1. Einleitung

Myasthenia gravis (MG) ist eine organspezifische Autoimmunerkrankung, die durch Autoantikörper verursacht wird, die sich gegen Proteine der postsynaptischen Membran richten und zu einer gestörten neuromuskulären Übertragung führen. Klinisch ist die MG durch Muskelschwäche und rasche Ermüdung gekennzeichnet, die sich bei körperlicher Anstrengung verschlimmert und durch Ruhe gelindert wird. Das Hauptautoantigen ist bei 80-90 % der MG-Patienten der muskuläre Acetylcholinrezeptor (AChR), ein pentamerer Kanal, der die synaptische Übertragung an der neuromuskulären Verbindungsstelle vermittelt. Bei einigen der verbleibenden MG-Patienten werden Autoantikörper gegen die muskelspezifische Tyrosinkinase (MuSK) oder gegen das Lipoprotein-bezogene Protein 4 (LRP4) nachgewiesen. Sowohl MuSK als auch LRP4 bilden einen Rezeptorkomplex, der das extrazelluläre Matrixproteoglykan Agrin bindet, was zu einer AChR-Clusterbildung führt, die für die Funktion der neuromuskulären Verbindungsstelle entscheidend ist.

Obwohl die MG eine Krankheit ist, die beide Geschlechter, alle Altersgruppen und alle Rassen betrifft, haben mehrere epidemiologische Studien eine geschlechts- und altersabhängige bimodale Verteilung der Inzidenzrate gezeigt, mit einer Spitze im zweiten und dritten Lebensjahrzehnt, die hauptsächlich bei Frauen beobachtet wird, und einer zweiten im sechsten und siebten Lebensjahrzehnt, die hauptsächlich bei Männern auftritt. Diese Beobachtung führte zur Einteilung der MG in eine frühe Form, die vor dem 50. Lebensjahr auftritt und in der Regel mit einer Thymushyperplasie zusammenhängt, und eine späte Form der MG (>50 Jahre) mit normalem oder atrophischem Thymus.

Das Ausmaß des genetischen Beitrags zur MG-Anfälligkeit wurde anhand von Familien- und Zwillingsstudien untersucht, die die familiäre Häufung der Krankheit und damit die genetische Vererbung widerspiegeln. Hohe Konkordanzraten von MG bei eineiigen Zwillingen im Vergleich zu zweieiigen Zwillingen deuten stark auf die Beteiligung genetischer Faktoren an der Pathogenese der MG hin. Darüber hinaus wurde in mehreren Studien berichtet, dass MG-Patienten auch an einer anderen Autoimmunerkrankung leiden können, am häufigsten an Schilddrüsenerkrankungen und rheumatoider Arthritis. Dieser Befund führt zu der Hypothese, dass eine allgemeinere Störung der immunologischen Funktion vorliegt.

Der menschliche Leukozyten-Antigen (HLA)-Komplex ist die wichtigste genomische Region, die bei der Entstehung der MG eine Rolle spielt. Die HLA-A1- und B8-Allele für die Klasse I und DR3 für die Klasse II bilden einen als „8.1“ bezeichneten Haplotyp, der reproduzierbar mit früh einsetzender MG und Thymushyperplasie in Verbindung gebracht wurde. Weitere Forschungen, die auf die Zerlegung dieses erweiterten A1-B8-DR3-Haplotyps abzielten, führten zur Identifizierung des MYAS1-Lokus, einer 1,2 Mb großen Region, die 36 Gene umfasst, an der Grenze zwischen der Klasse III und der proximalen Klasse I-Region, wodurch die Klasse-II-Loci ausgeschlossen und die vorherrschende Assoziation des B8-Allels gegenüber DR3 bestätigt wurde.

Neben den HLA wurden auch eine Reihe von HLA-ungebundenen genetischen Loci auf ihre Beteiligung an der MG-Anfälligkeit untersucht. Diese Ergebnisse wurden hauptsächlich durch Kandidatengenstudien gewonnen, während die Gene, die als mit der MG assoziiert oder nicht assoziiert gemeldet wurden, im Detail in diskutiert werden.

Der Interferon-(IFN)-Regulationsfaktor 5 (IRF-5) ist ein Mitglied der IRF-Familie von Transkriptionsfaktoren. IRF-5 wird durch IFN-α/B aktiviert und regelt eine Reihe proinflammatorischer Zytokine wie IL-6, TNF-α und IL-12 hoch, während er gleichzeitig die IFN-Genexpression induziert. Die Ergebnisse mehrerer Studien, die in zusammengefasst sind, haben IRF-5 als ein Anfälligkeitsgen für SLE identifiziert. Die Suche nach häufigen Varianten, die den IRF-5-Spiegel beeinflussen, führte zur Identifizierung des SNP rs10954213 (c.*555G > A), der sich innerhalb der polyA+-Signalsequenz AATAAA im 3′ UTR befindet. Das G-Allel unterbricht die Polyadenylierungsstelle und die Transkription wird weit stromabwärts beendet, wodurch längere und weniger stabile IRF-5 mRNA-Transkripte entstehen. Darüber hinaus bestimmt eine 30-Bp-In-Frame-Insertions-Deletionsvariante (rs60344245) im sechsten Exon von IRF-5 die Bildung von zwei Familien von Protein-Isoformen, die unterschiedliche Fähigkeiten haben, die Transkription von IRF-5-Zielgenen zu initiieren.

Das TNFα-induzierte Protein 3 (TNFAIP3), auch bekannt als A20, ist ein Schlüsselmolekül in der negativen Rückkopplungsregulation von NF-κB-abhängigen Reaktionen. Die hemmende Wirkung von TNFAIP3 auf die NF-κB-Signalgebung beruht auf der kooperativen Aktivität seiner beiden Ubiquitin-verarbeitenden Domänen: der N-terminalen Ovarialtumordomäne (OTU), die für die Deubiquitinierung von Rezeptor-interagierendem Protein 1 (RIP1), einem essentiellen Adaptorprotein des TNF-induzierten Signalwegs, verantwortlich ist, und der C-terminalen zinkfingerhaltigen Domäne, die als E3-Ubiquitin-Ligase fungiert und den proteasomalen Abbau von RIP1 fördert.

Der SNP rs13207033 (g.137965418G > A), der sich in der intergenen Region 6q23, etwa 185 kb stromaufwärts von TNFAIP3 befindet, beeinflusst wahrscheinlich die Genexpression durch das Vorhandensein potenzieller regulatorischer DNA-Elemente . Eine andere Studie zeigte, dass ein nicht-synonymer kodierender SNP (c.380T > G, rs2230926), der zu einer Veränderung von Phenylalanin zu Cystein am Rest 127 (p.F127C) in der OTU-Domäne des TNFAIP3-Proteins führt, mit SLE bei Personen europäischer Abstammung assoziiert ist.

Interleukin-10 (IL-10) ist ein pleiotropes Zytokin, das von verschiedenen Zelltypen, wie T-Zellen und Zellen der myeloischen Linie, ausgeschüttet wird. IL-10 ist aufgrund seiner stimulierenden Wirkung auf TH2-Zellen und der gleichzeitigen Unterdrückung von TH1-Zellen als entzündungshemmendes Zytokin charakterisiert worden. Darüber hinaus induziert IL-10 die Proliferation und Differenzierung von aktivierten B-Lymphozyten, was zu einer weiteren Aktivierung der humoralen Reaktion führt. Bei experimenteller autoimmuner MG (EAMG) führte die Verabreichung von IL-10 zu einem Anstieg der Anti-AChR-Antikörperspiegel, was auf eine krankheitsfördernde Rolle von IL-10 hindeutet .

In der flankierenden 5′-Sequenz des menschlichen IL-10-Gens wurden mehrere Varianten festgestellt. Drei SNPs, nämlich rs45552637 (A/C), rs1800872 (T/C) und rs1800896 (A/G), die sich an den Positionen -592, -819 bzw. -1082 befinden, bestimmen die Bildung von drei Haplotypen (GCC, ACC und ATA). Die Position dieser SNPs basiert auf der zuvor veröffentlichten Sequenz U16720, die in der EMBL-EBI-Datenbank hinterlegt ist. In einer Studie von Turner und Mitarbeitern wurde eine Korrelation zwischen diesen Haplotypen und der IL-10-Proteinproduktion in vitro festgestellt. Insbesondere wurde der GCC/GCC-Genotyp mit einer hohen Concanavalin A-induzierten IL-10-Produktion in Verbindung gebracht, die Genotypen GCC/ACC und GCC/ATA mit einer mittleren und die Genotypen ACC/ACC, ATA/ATA und ACC/ATA mit einer niedrigen IL-10-Produktion.

In der vorliegenden Studie wurde ein hypothesengesteuerter Ansatz gewählt, um die Beteiligung bestimmter gemeinsamer Varianten an der MG-Anfälligkeit zu bewerten. So führten wir eine Fall-Kontroll-Studie mit Kandidatengenen durch, wobei wir uns auf Gene konzentrierten, die eine entscheidende Rolle bei der Funktion des Immunsystems spielen, um herauszufinden, ob die zuvor berichteten Assoziationen zwischen den oben genannten Genen und anderen Autoimmunkrankheiten auch für MG zutreffen könnten.

2. Materialien und Methoden

2.1. Studienpopulation

Insgesamt wurden 101 nicht verwandte MG-Patienten hellenischer Abstammung in diese Studie aufgenommen. Die Blutproben der MG-Patienten wurden im Hellenic Pasteur Institute im Rahmen einer diagnostischen Routineuntersuchung entnommen. Nur AChR-positive MG-Patienten wurden in unsere Studie aufgenommen. Die MG-Diagnose basierte auf dem Vorhandensein von Anti-AChR-Antikörpern im Patientenserum unter Verwendung eines Radioimmunpräzipitationstests (RIPA). Wir schlossen absichtlich diejenigen Patienten von der genetischen Analyse aus, bei denen positive Autoantikörper gegen MuSK nachgewiesen wurden, um die Heterogenität der Studiengruppe zu verringern. Obwohl die Seren der MG-Patienten nicht auf Anti-LRP4-Autoantikörper untersucht wurden, wirft das Fehlen dieses Tests kein Problem der Heterogenität in der Studienpopulation auf, da Anti-LRP4- und Anti-AChR-Antikörper selten nebeneinander auftreten. Die wichtigsten Merkmale der Anti-AChR-MG-Gruppe (Alter bei Beginn der Erkrankung und Geschlecht) sind in Tabelle 1 zusammengefasst. Die Patienten hatten ihre schriftliche Einwilligung gegeben. Die Kontrollgruppe bestand aus 101 ethnisch und geschlechtlich identischen gesunden Personen.

2.2. Genotypisierung

Genomische DNA wurde von jeder Person aus einer peripheren venösen Blutprobe mit dem QIAamp Blood Midi Kit (Qiagen GmbH, Hilden, Deutschland) extrahiert. Polymerasekettenreaktionen (PCRs) wurden mit dem KAPA2G Fast HotStart ReadyMix Kit (KAPABIOSYSTEMS, Woburn, MA, USA) durchgeführt. Die Primersequenzen sind in den ergänzenden Materialien als ergänzende Tabelle 1 aufgeführt (siehe Tabelle 1 in den ergänzenden Materialien, online verfügbar unter http://dx.doi.org/10.1155/2012/484919), während die Reaktionsbedingungen auf Anfrage erhältlich sind.

Amplifikation durch PCR und Agarosegel-Elektrophorese-Analyse wurden zur Genotypisierung der 30 bp Insertions-/Deletionsvariante von IRF5 verwendet.

Der Restriktionsfragmentlängen-Polymorphismus (RFLP)-Test auf PCR-Basis wurde für den Nachweis des SNP rs2230926 (T > G) in TNFAIP3 verwendet. Die amplifizierten Fragmente von 549 bp wurden mit dem Restriktionsenzym Fnu4HI (New England Biolabs, Ipswich, MA, USA) verdaut und anschließend durch elektrophoretische Trennung auf einem Agarosegel mit 2 % w/v analysiert. Das G-Allel schafft eine Fnu4HI-Restriktionsstelle, was zum Verdau der Amplikons zu 319 und 230 bp-Fragmenten führt.

Die Identifizierung der Genotypen der IL-10-Promotor-SNPs wurde durch direkte DNA-Sanger-Sequenzierung durchgeführt. Ein Fragment von 585 bp, das alle drei Varianten enthält, wurde durch PCR amplifiziert. Die PCR-Produkte wurden mit dem säulenbasierten PureLink PCR Purification Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) aufgereinigt. Die Sequenz des 585 bp-Fragments wurde mit dem BigDye Terminator Chemistry v3.0 Kit auf einem Applied Biosystems DNA-Sequenzierer (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA) bestimmt. Die verwendeten Primer waren die gleichen wie bei der Amplifikation dieser Region.

Beide SNPs, rs10954213 (A/G) in der 3′ UTR von IRF5 und rs13207033 (G/A) in einer intergenen Region von 6q23, wurden mittels Echtzeit-PCR und hochauflösender Schmelzkurvenanalyse (HRM) auf einem RotorGene Q Echtzeit-Cycler (Qiagen GmbH, Hilden, Deutschland) genotypisiert. Die Amplifikation des Fragments, das den SNP von Interesse enthält, wurde mit dem Type-it HRM PCR-Kit (Qiagen GmbH, Hilden, Deutschland) gemäß den Herstelleranweisungen durchgeführt. Während der HRM erhöht sich die Temperatur von 65 auf 95°C mit einer Erwärmungsrate von 0,1°C/2 Sekunden, was zur Denaturierung der PCR-Produkte und zur Erstellung von Schmelzkurven führt, die für jeden Genotyp charakteristisch sind. Da eine einzige Basenpaarveränderung zu einer signifikanten Verschiebung der Schmelztemperatur führt (), basiert die Genotypisierung auf der Analyse der Schmelzprofile: Homozygote für das A-Allel weisen ähnliche Schmelzprofile auf, und zwar mit einem niedrigeren , im Vergleich zu den G/G-Homozygoten, während Heterozygote durch eine Veränderung der Form der Schmelzkurve unterschieden werden.

Bei allen Genotypisierungsverfahren wurden sorgfältig keine Template-Kontrollen einbezogen. Negative und positive Kontrollproben wurden zunächst durch DNA-Sequenzierung identifiziert und anschließend in allen Genotypisierungsverfahren verwendet. Jede Probe wurde in zweifacher Ausfertigung getestet, mit Ausnahme derjenigen, die durch PCR-RFLP und DNA-Sequenzierung analysiert wurden.

2.3. Statistische Analyse

Die Unterschiede in der Genotypverteilung und den Allelhäufigkeiten zwischen Fällen und Kontrollen wurden durch Analyse oder Fisher’s Exact Test berechnet. Werte unter 0,05 wurden als statistisch signifikant angesehen.

3. Ergebnisse

Die Genotypverteilungen aller Varianten waren sowohl in den MG-Patienten- als auch in den Kontrollgruppen mit dem Hardy-Weinberg-Gleichgewicht vereinbar (Daten nicht gezeigt).

Die Allel- und Genotyphäufigkeiten der IRF-5 rs60344245-Variante zeigten eine ähnliche Verteilung in den untersuchten Gruppen von 101 MG-Patienten und 100 Kontrollen (). Was den IRF-5 rs10954213 SNP betrifft, so wurde festgestellt, dass der Genotyp A/G bei MG-Patienten etwas häufiger vorkommt als bei den Kontrollen (54,8 % gegenüber 45,5 %), aber die Analyse ergab keinen signifikanten Unterschied (). Die Allel- und Genotyphäufigkeiten der beiden IRF-5-Varianten sind in Tabelle 2 aufgeführt.

Die Häufigkeit des Genotyps TNFAIP3 rs13207033 G/G war bei gesunden Kontrollen (44,6 %) im Vergleich zu MG-Patienten (33,3 %) erhöht. Die statistische Analyse ergab jedoch keinen signifikanten Unterschied zwischen den beiden Gruppen (). Im Falle des kodierenden SNP rs2230926 sind die Genotypen bei den 73 untersuchten MG-Patienten und 81 Kontrollen ähnlich verteilt, wie aus dem Wert hervorgeht. Die Genotyp-Häufigkeiten der rs2230926-Variante, sowohl bei MG-Patienten als auch bei Kontrollen, stimmen mit denen überein, die von Proben europäischer Abstammung (CEU) stammen, die Teil des internationalen HapMap-Projekts sind. Darüber hinaus wies unsere Studiengruppe Häufigkeiten des Genotyps rs13207033 auf, die mit den in der dbSNP-Datenbank für europäische Populationen berichteten Häufigkeiten vergleichbar sind. Die Genotypisierungsergebnisse der beiden TNFAIP3-Varianten sind in Tabelle 3 zusammengefasst.

Das Alter des Krankheitsausbruchs wurde ebenfalls bewertet, indem MG-Patienten in Patienten mit frühem und spätem Ausbruch unterteilt wurden. Es wurde kein signifikanter Unterschied in der Genotypverteilung zwischen den beiden Untergruppen und der Kontrollgruppe festgestellt (Daten nicht gezeigt).

Die DNA-Sequenzanalyse der IL-10-Promotorregion zeigte, dass der ACC/GCC-Genotyp sowohl bei MG-Patienten als auch bei den Kontrollen der am häufigsten beobachtete Genotyp war (23,72 % bzw. 28 %), gefolgt von dem Genotyp ATA/ACC mit geringer Sekretion, der bei 21,62 % aller MG-Patienten und bei 18 % der Kontrollen nachgewiesen wurde (Tabelle 4). In der aktuellen Studie wurde jedoch kein statistisch signifikanter Unterschied in der Verteilung des IL-10-Genotyps zwischen der Gesamtkohorte der MG-Patienten (d. h. der gesamten MG) und der Kontrollgruppe festgestellt (). Der Vergleich zwischen den Untergruppen nach dem Alter bei Beginn der Erkrankung zeigte, dass der GCC/GCC-Genotyp mit hoher IL-10-Sekretion bei MG im Frühstadium in geringer Häufigkeit vorkommt (4 %), während er bei MG-Fällen im Spätstadium überrepräsentiert ist (20 %) (Tabelle 4). Es zeigte sich ein statistischer Trend der Assoziation () zwischen der Verteilung des IL-10-Phänotyps und den beiden Untergruppen des frühen und späten Auftretens (Abbildung 1).

Abbildung 1

IL-10-Phänotyp-Verteilung in den Untergruppen der MG-Patienten mit frühem und spätem Auftreten.

4. Diskussion

MG ist eine heterogene Autoimmunerkrankung mit einer eindeutigen genetischen Veranlagung. Zusätzlich zu den HLA-Loci wurden mehrere häufige Varianten in HLA-ungebundenen Genen mit der Anfälligkeit für MG in Verbindung gebracht. Viele dieser risikoassoziierten Gene sind bei verschiedenen Autoimmunkrankheiten weit verbreitet, was die Vorstellung unterstützt, dass Autoimmunkrankheiten durch gemeinsame pathogenetische Wege gekennzeichnet sind. In dieser Studie haben wir eine Fall-Kontroll-Assoziationsstudie durchgeführt, um den Beitrag gemeinsamer Varianten in den Genen IRF-5, TNFAIP3 und IL-10 zur MG-Anfälligkeit zu untersuchen. Diese Gene wurden aufgrund ihrer entscheidenden Rolle bei der Regulierung der Immunantwort und ihrer bereits bekannten Beteiligung am Autoimmunprozess als gute Kandidaten angesehen. Nur Patienten mit Anti-AChR-Antikörpern in ihrem Serum wurden in die genetische Analyse einbezogen, da man davon ausging, dass sie eine homogenere Untergruppe darstellen als die breitere MG-Gruppe. Diese Untergruppe wurde außerdem in zwei verschiedene Krankheitsgruppen unterteilt: MG-Patienten im Frühstadium, die überwiegend Frauen umfassen, und MG-Patienten im Spätstadium, die einen höheren Anteil an Männern aufweisen.

Soweit uns bekannt ist, ist dies die erste Studie in einer beliebigen Population, in der der Zusammenhang zwischen MG und gemeinsamen Varianten der Gene IRF-5 und TNFAIP3 untersucht wurde. Aus früheren Studien, die in zusammengefasst wurden, geht hervor, dass mehrere Varianten im IRF-5-Lokus reproduzierbar mit SLE assoziiert sind, was darauf hindeutet, dass IRF-5 ein Anfälligkeitsgen für Lupus ist. Es wurde festgestellt, dass der rs10954213-SNP die mRNA-Polyadenylierung beeinflusst und somit die Menge des IRF-5-Proteins beeinträchtigt; A/A-Homozygoten exprimieren im Vergleich zu G/G-Homozygoten etwa 5-fach höhere Mengen an immunreaktivem IRF-5. Wie bei der Variante rs60344245 werden durch die Deletion von 30 bp (GGCCGCCTACTCTGCAGCCGCCCACTCTGC/-) 10 Aminosäuren aus dem IRF-5-Protein entfernt und eine prolin-, glutaminsäure-, serin- und threoninreiche (PEST) Domäne verändert. In der IRF-Proteinfamilie sind solche Domänen an Proteininteraktionen beteiligt und verursachen außerdem einen schnellen proteolytischen Abbau. Trotz ihrer offensichtlichen funktionellen Rolle konnte in der aktuellen Studie kein signifikanter Zusammenhang zwischen den IRF-5-Varianten rs10954213 und rs60344245 und MG nachgewiesen werden (bzw. rs60344245), was darauf hindeutet, dass IRF-5 möglicherweise nicht an der Pathogenese von MG beteiligt ist.

Außerdem haben jüngste Ergebnisse von GWA-Studien signifikante Zusammenhänge zwischen Varianten im menschlichen TNFAIP3-Lokus und einem breiten Spektrum von Autoimmunerkrankungen aufgezeigt. Eine GWA-Untersuchung von Patienten mit rheumatoider Arthritis und anticitrullinierten Peptid-Antikörpern ergab starke Hinweise auf einen Zusammenhang zwischen dem SNP rs13207033 und der Entwicklung von RA . In ähnlicher Weise berichtete eine Studie von Musone und Mitarbeitern über die Assoziation des nicht-synonymen kodierenden SNP rs2230926 mit SLE. Funktionelle Studien zur Bestimmung der biologischen Auswirkungen von rs2230926 zeigten, dass das Minor-Cys127-Protein eine verringerte hemmende Aktivität aufweist. Es wurde jedoch keine Assoziation zwischen MG und den TNFAIP3-SNPs rs13207033 () und rs2230926 () beobachtet.

Insgesamt könnten unsere Daten darauf hindeuten, dass die organspezifische MG einen anderen genetischen Hintergrund haben könnte, der zu ihrer Abgrenzung von einem breiten Cluster systemischer Autoimmunerkrankungen führt, zu denen auch SLE und RA gehören. Eine alternative Erklärung für das Fehlen einer Assoziation in unserer Studie könnte mit der unzureichenden statistischen Aussagekraft aufgrund der relativ kleinen Stichprobengröße zusammenhängen. Es ist allgemein bekannt, dass häufige Varianten nur einen bescheidenen Teil des genetischen Risikos für Autoimmunkrankheiten ausmachen. In solchen Fällen können Tausende von Proben erforderlich sein, um ein Assoziationssignal zu entdecken, das sich vom Hintergrundrauschen unterscheiden lässt. Bei Krankheiten mit geringer Prävalenz, wie z. B. MG, ist es jedoch sehr schwierig, große Stichproben zu rekrutieren. Es ist erwähnenswert, dass die Abteilung für MG-Diagnose im Hellenischen Pasteur-Institut die einzige Abteilung in Griechenland ist, die seit 1983 systematisch Blutproben erhält und analysiert. Daher ist unsere Sammlung von MG-DNA-Proben derzeit die größte in Griechenland, und sie wird ständig durch neue Fälle bereichert.

Außerdem hätte trotz der spezifischen Auswahl der Anti-AChR-Patienten und ihrer Einteilung in frühe und späte Ausbrüche eine weitere Klassifizierung nach den Thymusanomalien (Thymom oder Hyperplasie) aufschlussreich sein können; histologische Daten waren jedoch nicht verfügbar.

Ein unerwartetes Ergebnis war schließlich das Fehlen einer Assoziation der IL-10-Promotor-SNPs mit MG. Da diese Varianten vermutlich innerhalb der IL-10-Promotorregion liegen, könnten sie die Bindung von Transkriptionsfaktoren beeinflussen, die die IL-10-Expression regulieren. Eine kürzlich von Alseth und Mitarbeitern an der norwegischen Bevölkerung durchgeführte Studie ergab eine Assoziation des ACC/ACC-Genotyps mit der Untergruppe der Titin-Antikörper-positiven MG-Patienten, während eine statistisch signifikant erhöhte ATA/ATA-Häufigkeit bei MG-Patienten im Frühstadium beobachtet wurde. In unserer Gruppe der hellenischen MG-Patienten wurde kein Hinweis auf einen Zusammenhang festgestellt, als wir die Genotypverteilung zwischen der gesamten Kohorte der MG-Patienten und der Kontrollgruppe verglichen (). Der GCC/GCC-Genotyp zeigte jedoch einen statistischen Trend der Assoziation mit MG in den verschiedenen Untergruppen der frühen und späten MG-Patienten (). Daher könnten weitere Studien mit größeren Stichprobengrößen mögliche Zusammenhänge zwischen MG und IL-10 aufdecken. Bemerkenswert ist auch die Tatsache, dass die Allelhäufigkeiten für einen bestimmten SNP in verschiedenen ethnischen Gruppen erheblich variieren können. Der festgestellte Unterschied in der Häufigkeit des ACC/ACC-Genotyps zwischen der norwegischen und der hellenischen Kontrollgruppe (3,4 % gegenüber 15 %) spiegelt diesen Umstand wider.

Insgesamt war dies unseres Wissens der erste Versuch, den möglichen Zusammenhang zwischen gemeinsamen genetischen Varianten von IRF-5 und TNFAIP3 und den genetischen Grundlagen der MG in einer beliebigen Population zu untersuchen, während weitere Studien erforderlich sind, um den noch weitgehend unbekannten genetischen Hintergrund der MG zu entschlüsseln.

Danksagungen

Die Autoren danken den MG-Patienten und Freiwilligen, die an unserer Studie teilgenommen haben. Anna Kokla und Maria Belimezi vom Hellenischen Pasteur-Institut danken wir für ihre Unterstützung bei der Sammlung von MG-Patientenproben. Die vorliegende Studie wurde finanziell unterstützt durch Zuschüsse der Europäischen Kommission Fight MG an S. J. Tzartos und GEN2PHEN (FP7-200754) an G. P. Patrinos, mit Beteiligung von Mitteln aus dem Thales-Projekt (Autoimmunität) an S. J. Tzartos und K. Poulas und dem Hellas/Turkey Bilateral Collaboration Projekt (MuSK-myasthenia gravis) an K. Poulas.

Ergänzende Materialien