Enzymaktivitätstest

Die überwiegende Mehrheit der katalysierenden biologischen Prozesse wird von Enzymen durchgeführt, die in lebenden Organismen eine Vielzahl von Funktionen erfüllen. Sie sind unentbehrlich für Stoffwechselprozesse, zelluläre Signalübertragung und Regulierung und können Bewegung und aktiven Transport von Molekülen erzeugen. Enzymatische Reaktionen wandeln gezielt Substratmoleküle in chemisch veränderte Produkte um. Diese Modifikationen umfassen proteolytischen oder glykolytischen Abbau, chemische Modifikationen wie Phosphorylierung, Acylierung, Glykosylierung oder oxidative und reduktive Prozesse. Eine dysregulierte Enzymaktivität kann zu Krankheiten führen. Daher gelten Enzyme als attraktive Ziele für pharmakologische Interventionen in der Arzneimitteltherapie.

Unsere jahrzehntelange Erfahrung in der Entwicklung und Herstellung aktiver Enzyme und ihrer Substrate unterstützt die Entwicklung eines ständig wachsenden Portfolios biochemischer Assays. Wir bieten Dienstleistungen für enzymatische Assays zur Unterstützung von Wissenschaftlern, die sich auf die Enzym- und Proteinforschung konzentrieren:

• Kinetische Bewertung von Enzymaktivität und -hemmung.
• Inhibitorenscreening und -validierung.
• IC50-Bestimmung von Arzneimittelwirkstoffen.
• Enzym-Inhibitor-Studien zur Analyse der Wirkungsweise
• Untersuchungen zur Reversibilität der Enzymhemmung
• Substrat-Profilierung zur Analyse der Selektivität von Enzymen

Unsere Enzymaktivitäts-Assays beinhalten zunächst die Immunabscheidung des interessierenden Proteins und anschließend die Messung des Substrat- oder Produktumsatzes. Dabei kommen nur monoklonale Antikörper zum Einsatz, die geprüft wurden, um das Enzym in aktiver Form und in Komplexen zu isolieren, die wahrscheinlich ihre Assoziationen in situ darstellen. Das hat viele Vorteile. Das Enzym wird von anderen Proteinen getrennt, die dieselben Substrate oder Produkte verwenden oder produzieren, und dies ermöglicht einfache Assays wie die Nutzung von ATP, NADH, Pyruvat usw., die in vivo mehrfachen Reaktionen unterliegen. Für die meisten Enzyme, für die wir Kits zur Aktivitätsbestimmung haben, bieten wir auch Sandwich-ELISA-Tests an. Durch die Kombination dieser beiden Tests ist es möglich, spezifische Aktivitätsdaten zu erhalten. Da das Enzym von anderen zellulären Komponenten getrennt ist, können außerdem die posttranslationalen Modifikationen (PTMs), die es zum Zeitpunkt des Assays enthält, z. B. durch anschließende Massenspektrometrie oder Reaktion mit PTM-spezifischen Antikörpern gemessen werden.