Luciferase Assays

Det er lettere at forstå, hvordan en promotor eller et responselement kan kontrollere genekspression, når det undersøges med et reportergen. Luciferaseenzymer er ideelt egnede til reporterassays med enkel lysbaseret detektion og høj følsomhed, der kan kvantificere selv små ændringer i ekspressionen. Mens reporterassays ofte anvendes til at vurdere ændringer i promotoraktivitet, kan de også anvendes til at undersøge signaltransduktion, proteinfunktion, miRNA-regulering og endda realtidsmåling af processer i levende organismer.

Grundlaget for et reporterassay er vektoren, som bærer reportergenet, og detektionsreagenserne, som leverer et substrat til at konvertere luciferaseenzymets aktivitet til et lyssignal. Reagenser til dobbeltluciferase-detektion slukker det første reporter-signal, før det andet aflæses, så det er muligt at måle to reporter-signaler sekventielt fra den samme prøve. Den anden reporter indgår ofte som en intern kontrol for at opnå mere nøjagtige data.

Når reportervektoren er udvalgt og eventuelle elementer klonet ind (om nødvendigt), indføres vektoren i dyrkede celler, typisk ved hjælp af transfektionsbaserede metoder, udtrykkes og aktiviteten påvises med lytiske (slutpunkt) reagenser eller reagenser til levende celler til måling af ændringer i de samme celler over tid. Luciferase-reporterassays kan multiplexes med andre assays for at vurdere apoptose, metabolisme og meget mere. Måling af luciferase-assays udføres typisk ved hjælp af et pladebaseret luminometer.