Hvad er fluorescensspektroskopi?

Hvad er et fluorescensspektrum?

Figur. 1: Et fluorescens excitationsspektrum (blå) og et emissionsspektrum (lilla) er spejlbilleder af hinanden

Fluorescensspekter i stationær tilstand er, når molekyler, der er exciteret af en konstant lyskilde, udsender fluorescens, og de udsendte fotoner, eller intensiteten, detekteres som en funktion af bølgelængden. Et fluorescensemissionsspektrum er, når excitationsbølgelængden er fast, og emissionsbølgelængden scannes for at få et plot af intensiteten i forhold til emissionsbølgelængden.

Et fluorescens excitationsspektrum er, når emissionsbølgelængden er fast, og excitationsmonokromatorbølgelængden scannes. På denne måde giver spektret oplysninger om de bølgelængder, ved hvilke en prøve vil absorbere, således at den vil emittere ved den enkelte emissionsbølgelængde, der er valgt til observation. Det svarer til absorbansspektret, men er en meget mere følsom teknik med hensyn til detektionsgrænser og molekylær specificitet. Excitationsspektre er specifikke for en enkelt emitterende bølgelængde/art i modsætning til et absorbancespektrum, som måler alle absorberende arter i en opløsning eller prøve. Emissions- og excitationsspektret for en given fluorofor er spejlbilleder af hinanden. Typisk forekommer emissionsspektret ved højere bølgelængder (lavere energi) end excitations- eller absorbancespektret.

Disse to spektraltyper (emission og excitation) bruges til at se, hvordan en prøve ændrer sig. Den spektrale intensitet og eller peakbølgelængden kan ændre sig med varianter som temperatur, koncentration eller interaktioner med andre molekyler omkring den. Dette omfatter quencher-molekyler og molekyler eller materialer, der involverer energioverførsel. Nogle fluorophorer er også følsomme over for opløsningsmiddelmiljøets egenskaber såsom pH, polaritet og visse ionkoncentrationer.