Enzymaktivitetstest

De fleste katalyserende biologiske processer udføres af enzymer, som har en lang række forskellige funktioner i levende organismer. De er uundværlige for metaboliske processer, cellulær signalering og regulering og kan generere bevægelse og aktiv transport af molekyler. Enzymatiske reaktioner omdanner specifikt substratmolekyler til kemisk modificerede produkter. Disse modifikationer omfatter proteolytisk eller glykolytisk nedbrydning, kemiske modifikationer som f.eks. fosforylering, acylering, glykosylering eller oxidative og reduktive processer. Dysreguleret enzymaktivitet kan føre til sygdomstilstande. Derfor anses enzymer for at være attraktive mål for farmakologisk intervention i forbindelse med lægemiddelbehandling.

Vores årtiers erfaring med design og fremstilling af aktive enzymer og deres substrater understøtter udviklingen af en stadig voksende portefølje af biokemiske assays. Vi leverer tjenester på enzymatiske assays for at hjælpe forskere med fokus på enzym- og proteinforskning:

• Kinetisk evaluering af enzymaktivitet og hæmning.
• Inhibitor-screening og -validering.
• IC50-bestemmelse af lægemiddelforbindelser.
• Enzymhæmmerundersøgelser med analyse af virkemåde
• Undersøgelser af reversibilitet af enzymhæmning
• Substratprofilering med analyse af selektivitet af enzymer

Vores enzymaktivitetsassays omfatter først immunokapture af det pågældende protein efterfulgt af måling af substrat- eller produktomsætning. Disse anvender kun monoklonale antistoffer, der er blevet screenet for at isolere enzymet i aktiv form og i komplekser, der sandsynligvis repræsenterer deres sammenslutninger in situ. Der er mange fordele. Enzymet er adskilt fra andre proteiner, der anvender eller producerer de samme substrater eller produkter som dem, der er screenet, og dette gør det muligt at foretage enkle analyser såsom udnyttelse af ATP, NADH, pyruvat osv. For de fleste af de enzymer, som vi har aktivitetsassay-kits til, tilbyder vi også Sandwich ELISA-assays af mængde. Ved at kombinere de to er det muligt at generere specifikke aktivitetsdata. Da enzymet desuden er adskilt fra andre cellulære komponenter, kan de posttranslationelle modifikationer (PTM’er), det indeholder på tidspunktet for analysen, måles f.eks. ved efterfølgende massespektrometri eller reaktion med PTM-specifikke antistoffer.