Luciferase Assays

Poznat, jak může promotor nebo reakční prvek řídit genovou expresi, je snazší, když se studuje pomocí reportérového genu. Enzymy luciferázy jsou ideální pro reportérové testy s jednoduchou detekcí na základě světla a vysokou citlivostí, která dokáže kvantifikovat i malé změny v expresi. I když se reportérové testy často používají k hodnocení změn v aktivitě promotoru, lze je také použít ke zkoumání přenosu signálu, funkce proteinů, regulace miRNA a dokonce k měření procesů v živých organismech v reálném čase.

Základem reportérového testu je vektor, který nese reportérový gen, a detekční činidla, která poskytují substrát pro přeměnu aktivity enzymu luciferázy na světelný signál. Detekční činidla s duální luciferázou zhášejí první reportérový signál před odečtením druhého, aby bylo možné měřit dva reportéry postupně z téhož vzorku. Druhý reportér je často zahrnut jako vnitřní kontrola pro přesnější údaje.

Po výběru reportérového vektoru a naklonování všech prvků (je-li to nutné) se vektor zavede do kultivovaných buněk, obvykle pomocí metod založených na transfekci, exprimuje se a aktivita se detekuje pomocí lytických (end-point) činidel nebo činidel pro živé buňky pro měření změn ve stejných buňkách v průběhu času. Luciferázové reportérové testy lze multiplexovat s dalšími testy pro hodnocení apoptózy, metabolismu a dalších. Měření luciferázových testů se obvykle provádí pomocí luminometru na bázi destiček.

.