Diagnostický test Angelmanova a Prader-Williho syndromu je rychlý, přesný a levnější
On 5 ledna, 2022 by adminVýzkumníci vyvinuli nový rychlý a přesný molekulární diagnostický test pro pacienty s Angelmanovým a Prader-Williho syndromem.
Jejich studie „A rapid and accurate methylation-sensitive high-resolution melting analysis assay for diagnosis of Prader Willi and Angelman patients“ byla publikována v časopise Molecular Genetics & Genomic Medicine.
Syndromy Prader-Willi (PWS) a Angelman (AS) jsou dvě vzácné genetické poruchy způsobené imprintingovými defekty ve stejné oblasti 15. chromozomu. Zatímco PWS je spojen se ztrátou funkce otcovských genů, Angelmanův syndrom je způsoben ztrátou funkce mateřských genů. Genomický imprinting je proces, při kterém je jedna kopie genu, buď mateřská, nebo otcovská, umlčena chemickou modifikací DNA zvanou metylace.
„Laboratorní diagnostika PWS a AS je náročná a vyžaduje několik molekulárních a cytogenetických metod k objasnění genetického mechanismu, který vede ke vzniku syndromu,“ napsali badatelé.
Analýza vzorců metylace DNA ve specifické oblasti chromozomu 15 – známé jako lokus SNURF-SNRPN pomocí metylačně specifické polymerázové řetězové reakce (MS-PCR, technika, která detekuje změny metylace DNA ve specifických oblastech sekvence DNA) – umožňuje vědcům diagnostikovat a odlišit pacienty s PWS od pacientů s AS.
„Přestože je sekvenování DNA považováno za „zlatý standard“ pro screening mutací, zůstává tato metodika relativně drahá, pracná a časově náročná,“ napsali vědci.
V této studii vědci vyvinuli metodu založenou na tání s vysokým rozlišením (HRM, technika, která umožňuje výzkumníkům rozlišit normální a mutované sekvence DNA na základě jejich profilu tání). Jedná se o jednoduchou, rychlou, citlivou, specifickou a levnou alternativu sekvenování DNA pro diagnostiku a rozlišení pacientů s PWS a AS.
Pro testování a ověření nové metody MS-HRM vědci nejprve izolovali DNA ze vzorků krve 43 pacientů s podezřením na PWS nebo AS. Poté provedli a porovnali výsledky standardní metody MS-PCR s novou metodou MS-HRM.
Výsledky testů ukázaly, že metody MS-HRM a MS-PCR se ve všech případech shodovaly a identifikovaly 19 (44 %) pacientů s PWS, tři (7 %) s AS a 21 (49 %) pacientů bez změn.
Následná fluorescenční in situ hybridizace (FISH, technika, která umožňuje výzkumníkům vizualizovat specifické oblasti chromozomů označené fluorescenční sondou) provedená u 19 (44 %) pacientů odhalila čtyři případy PWS způsobené delecí (kdy dojde ke ztrátě části sekvence DNA genu) na 15. chromozomu.
MS-HRM „nepotřebuje další techniky, jako je elektroforéza v agarózovém gelu , což zkracuje dobu potřebnou k získání přesného výsledku a snižuje riziko křížové kontaminace mezi vzorky,“ napsali vědci.
„Citlivost MS-HRM umožňující detekci nepatrného zlomku vzorku je důležitá při analýze vzorků, které se obtížně získávají zejména od novorozených hypotonických dětí. Kromě toho vysoká reprodukovatelnost HRM činí tuto metodu vhodnou pro výzkumné i diagnostické aplikace při studiu syndromů PWS a AS,“ dodali.
„Rychlá a přesná diagnóza PWS nebo AS umožňuje účinnou medikamentózní intervenci, která předchází řadě charakteristických rysů těchto poruch a zajišťuje lepší kvalitu života,“ uzavřeli.
- Detaily autora
Napsat komentář