Co je fluorescenční spektroskopie?

Co je to fluorescenční spektrum?

Obr. 1: Fluorescenční excitační spektrum (modré) a emisní spektrum (fialové) jsou navzájem zrcadlovými obrazy

Fluorescenční spektra v ustáleném stavu jsou taková, kdy molekuly excitované konstantním zdrojem světla emitují fluorescenci a emitované fotony neboli intenzita jsou detekovány jako funkce vlnové délky. Emisní fluorescenční spektrum je takové, kdy je fixována excitační vlnová délka a skenována emisní vlnová délka, aby se získal graf závislosti intenzity na emisní vlnové délce.

Exitační fluorescenční spektrum je takové, kdy je fixována emisní vlnová délka a skenována vlnová délka excitačního monochromátoru. Tímto způsobem spektrum poskytuje informace o vlnových délkách, při kterých bude vzorek absorbovat tak, aby emitoval při jediné emisní vlnové délce zvolené pro pozorování. Je to obdoba absorpčního spektra, ale je to mnohem citlivější technika z hlediska mezí detekce a molekulární specifičnosti. Excitační spektra jsou specifická pro jednu emisní vlnovou délku/druh na rozdíl od absorpčního spektra, které měří všechny absorbující druhy v roztoku nebo vzorku. Emisní a excitační spektrum pro daný fluorofor jsou navzájem zrcadlovými obrazy. Emisní spektrum se obvykle vyskytuje na vyšších vlnových délkách (s nižší energií) než excitační nebo absorpční spektrum.

Tyto dva typy spekter (emisní a excitační) se používají ke zjištění, jak se vzorek mění. Intenzita spektra a nebo vlnová délka píku se může měnit s variantami, jako je teplota, koncentrace nebo interakce s jinými molekulami v okolí. To zahrnuje zhášecí molekuly a molekuly nebo materiály, které zahrnují přenos energie. Některé fluorofory jsou také citlivé na vlastnosti prostředí rozpouštědla, jako je pH, polarita a určité koncentrace iontů.

.