Como é que sei se o anticorpo vai reagir de forma cruzada?

Reactividade cruzada ocorre quando um anticorpo criado contra um antigénio específico reconhece dois antigénios que têm regiões estruturais semelhantes.

O que é a reactividade cruzada?

Um anticorpo tem uma sequência específica de aminoácidos (a região Fab) que dita a sua afinidade para um antigénio específico. A reatividade cruzada entre antígenos ocorre quando um anticorpo criado contra um antígeno específico tem uma alta afinidade concorrente em relação a um antígeno diferente. Este é frequentemente o caso quando dois antígenos têm regiões estruturais semelhantes que o anticorpo reconhece.

Reactividade cruzada pode invalidar os resultados de um experimento e, assim, impactar a reprodutibilidade científica. Assim, testar um anticorpo para reatividade cruzada com proteínas intimamente relacionadas é um experimento de validação crítico.

Como verificar a reatividade cruzada?

A reatividade cruzada nem sempre é uma qualidade negativa. Por vezes pode melhorar a utilidade de um anticorpo. Por exemplo, a reactividade cruzada de um anticorpo para um alvo entre espécies permite que o mesmo anticorpo seja usado em múltiplos organismos modelo.

Reactividade cruzada entre espécies ocorre frequentemente para anticorpos derivados de antigénios humanos. Muitos anticorpos humanos no catálogo Proteintech têm significativa reatividade cruzada com as proteínas homólogas em modelos não humanos, tais como rato, rato, macaco ou zebrafish.

Baseado na homologia de uma sequência de proteínas e publicações usando nossos anticorpos em organismos não humanos, muitos dos anticorpos da Proteintech podem ser usados não só para amostras humanas, mas também para uma variedade de organismos. A homologia pode ser testada utilizando um alinhamento em pares da sequência de imunogenicidade e antígeno alvo através do site do NCBI-BLASTwebsite, e mais informações podem ser verificadas no site de recursos da Proteína Universal UniProt.

Qual é o “número certo” para a homologia prever a reactividade cruzada?

Com base na nossa experiência, se o imunogénio e a sequência da potencial homologia de proteína reactiva cruzada partilham 75% da sequência, prevê-se uma reacção cruzada. Se a sua amostra não for humana, é recomendado um policlonal, porque há uma mistura de epitopes reconhecidos.

O meu anticorpo reage cruzadamente com outras espécies?

Depende da extensão da semelhança da sequência proteica entre o imunógeno e a sequência proteica potencialmente reativa cruzada.

Como evitar a reactividade cruzada no western blot

Se possível, recomenda-se o uso do anticorpo secundário específico do primeiro anticorpo usado; por exemplo, se o anticorpo primário for rato, então o anticorpo secundário deve ser o anticorpo anti-rato IgG-HRP. Caso o anticorpo secundário seja policlonal e gerado contra toda a molécula IgG, então o anticorpo do coelho que reconhece o rato primário Ab pode não ser a melhor escolha por causa do reconhecimento da região comum da Cadeia Leve Kappa.

Como evitar reactividade cruzada durante experiências de imuno-reactividade

Reactividade cruzada pode ocorrer em ensaios de imuno-reactividade usando amostras derivadas de tecidos; portanto, é comum usar fragmentos, em vez de IgGs inteiros, como imunoglobulinas primárias (por exemplo, enquanto se trabalha com anticorpos de ratos em tecidos de ratos). Além disso, enquanto se faz uma coloração múltipla, para garantir que não haja reações cruzadas, tente usar anticorpos secundários diferentes, por exemplo, 568 anticorpos de coelho anti-cabra com um 488 anti-rato de coelho, que são bastante comuns e fáceis de encontrar.

Qual é a reação cruzada e reativa cruzada de anticorpos secundários?

Anticorpos secundários cruzados são aqueles anticorpos policlonais que são fabricados com uma etapa de purificação adicional para filtrar os membros que se ligam às espécies de imunoglobulina (IgG) fora do alvo. Este processo pode diminuir a reactividade cruzada das espécies e aumentar a especificidade. Dependendo do experimento estabelecido, há variedades de anticorpos secundários cruzados e altamente cruzados.

1. Anticorpos policlonais vs. monoclonais

2. Selecção de anticorpos secundários

3. Antigénio de proteína ou peptídeo? Vantagens e desvantagens