Angelman, Teste de diagnóstico Prader-Willi é rápido, preciso, menos caro

Pesquisadores desenvolveram um novo teste de diagnóstico molecular rápido e preciso para pacientes com síndrome de Angelman e Prader-Willi.

O seu estudo, “Um ensaio rápido e preciso de análise de fusão sensível à metilação de alta resolução para o diagnóstico de pacientes com síndrome de Prader Willi e Angelman”, foi publicado em Molecular Genetics & Genomic Medicine.

Prader-Willi (PWS) e Angelman (AS) são duas doenças genéticas raras causadas por defeitos de impressão na mesma região do cromossoma 15. Enquanto a PWS está associada à perda da função dos genes paternais, Angelman é causada pela perda da função dos genes maternos. O imprinting genômico é o processo pelo qual uma cópia de um gene, seja a cópia materna ou paterna, é silenciada por uma modificação química do DNA chamada metilação.

“O diagnóstico laboratorial de PWS e AS é um desafio e exige vários métodos moleculares e citogenéticos para elucidar o mecanismo genético que leva ao desenvolvimento da síndrome”, os investigadores escreveram.

Análises dos padrões de metilação do DNA em uma região específica do cromossomo 15 – conhecido como o locus SNURF-SNRPN pela reação em cadeia da polimerase específica da metilação (MS-PCR, uma técnica que detecta alterações na metilação do DNA em regiões específicas de uma seqüência de DNA) – permite aos pesquisadores diagnosticar e distinguir pacientes com PWS daqueles com AS.

“Embora o sequenciamento de DNA seja considerado o ‘padrão ouro’ para o rastreamento de mutações, esta metodologia permanece relativamente cara, trabalhosa e demorada”, os pesquisadores escreveram.

Neste estudo, os cientistas desenvolveram um método baseado no derretimento de alta resolução (HRM, uma técnica que permite aos pesquisadores distinguir entre sequências de DNA normais e mutantes com base em seu perfil de derretimento). É uma alternativa simples, rápida, sensível, específica e de baixo custo ao sequenciamento de DNA para diagnosticar e distinguir pacientes com PWS e AS.

Para testar e validar o novo método MS-HRM, os pesquisadores primeiro isolaram DNA de amostras de sangue de 43 pacientes suspeitos de terem PWS ou AS. Em seguida, realizaram e compararam os resultados do padrão MS-PCR com o novo método MS-HRM.

Os resultados dos testes mostraram que MS-HRM e MS-PCR estavam de acordo em todos os casos, identificando 19 (44%) pacientes com PWS, três (7%) com AS, e 21 (49%) sem alterações.

Hibridização in situ por fluorescência subseqüente (FISH, técnica que permite aos pesquisadores visualizar regiões específicas dos cromossomos marcados com uma sonda fluorescente) realizada em 19 (44%) pacientes detectaram quatro casos de PWS causados por uma deleção (onde parte da seqüência de DNA de um gene é perdida) no cromossomo 15.

A MS-HRM “não necessita de técnicas adicionais como a eletroforese em gel de agarose, reduzindo o tempo necessário para obter um resultado preciso e reduzindo os riscos de contaminação cruzada entre amostras”, os pesquisadores escreveram.

“A sensibilidade da MS-HRM permite a detecção de uma pequena fração da amostra é importante na análise das amostras, que são difíceis de obter especialmente de recém-nascidos hipotônicos. Além disso, a alta reprodutibilidade da MHR torna este método adequado tanto para a investigação como para aplicações diagnósticas no estudo das síndromes de PWS e AS”, acrescentaram.

“Um diagnóstico rápido e preciso da PWS ou AS permite uma intervenção médica eficaz, evitando várias características destes distúrbios, proporcionando uma melhor qualidade de vida”, concluíram.

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Joana tem um BSc em Biologia, Mestrado em Biologia Evolutiva e do Desenvolvimento e Doutoramento em Ciências Biomédicas pela Universidade de Lisboa, Portugal. O seu trabalho tem-se centrado no impacto da sinalização não canónica de Wnt no comportamento colectivo das células endoteliais – células que constituem o revestimento dos vasos sanguíneos – encontradas no cordão umbilical dos recém-nascidos.

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Joana é Licenciada em Biologia, Mestre em Biologia Evolutiva e do Desenvolvimento e Doutorada em Ciências Biomédicas pela Universidade de Lisboa, Portugal. O seu trabalho tem-se centrado no impacto da sinalização não canónica de Wnt no comportamento colectivo das células endoteliais – células que constituem o revestimento dos vasos sanguíneos – encontradas no cordão umbilical dos recém-nascidos.

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